Тест 3 поросенка ру: Викторина по сказке Три поросенка — пройти тест онлайн — игра — вопросы с ответами

Тест по сказке «Три поросёнка»

Имя Фамилия ____________________________ Тест по сказке «Про трёх поросят» I — вариант Выбери один правильный ответ 1. У мамы свиньи было просят : а) четверо в) пятеро б) трое г) двое 2. Волк позвал поросёнка срывать с дерева : а) вишню в) шишку б) грушу г) яблоко 3. Какой дом не был построен в сказке : а) кирпичный в) глиняный б) соломенный г) из хвороста 4. Сколько героев в этой сказке : а) трое в) двое б) четверо г) один 5. Что купил поросёнок на ярмарке : а)маслобойку в) метлу б)ведро г) корзину

9.02. 6. Какая это сказка? а) народная б) авторская 7. Что срывал в огороде поросёнок : а) свеклу в) морковь б)репу г) огурцы 8. Эта сказка : а) Украинская в) Английская б) Русская г) Норвежская 9. Третий поросёнок оказался самым: а) смелым в) милым б) весёлым г) трусливым 10. Чем закончилась сказка? а) волк проглотил всех поросят б) поросёнок спас своих братцев в) волк подружился с третьим поросёнком

Имя Фамилия ____________________________ Тест по сказке «Про трёх поросят» II — вариант Выбери один правильный ответ 1. Какая это сказка? а) народная б) авторская 2. Сколько героев в этой сказке : а) трое в) двое б) четверо г) один 3. Чем закончилась сказка? а) волк проглотил всех поросят б) поросёнок спас своих братцев в) волк подружился с третьим поросёнком 4. У мамы свиньи было просят : а) четверо в) пятеро б) трое г) двое 5. Что купил поросёнок на ярмарке : а)маслобойку в) метлу б)ведро г) корзину

9.02. 6. Эта сказка : а) Украинская в) Английская б) Русская г) Норвежская 7. Волк позвал поросёнка срывать с дерева : а) вишню в) шишку б) грушу г) яблоко 8. Третий поросёнок оказался самым: а) смелым в) милым б) весёлым г) трусливым 9. Какой дом не был построен в сказке : а) кирпичный в) глиняный б) соломенный г) из хвороста 10. Что срывал в огороде поросёнок : а) свеклу в) морковь б)репу г) огурцы

Секс-тест-3. Вариант Б >> порно рассказ на ШпилиВили

• Оценка: 7.7/10
• Проголосовало: 735
• Категории: Измена

Помню была одна очень прикольная девочка, которую я раскрутил РЖД по варианту «Б». В идеи Секс-Теста есть вариант «А» и вариант «Б». Вариант «А» — это когда ответы теста уходят на почту к девочке и потом она на них реагирует, а вариант «Б» — это ситуация, когда она задавала вопрос с тестом, но ссылка с течением времени умерла. И тогда все приходится ей рассказывать как бы самому. То есть ситуация замкнута сама на себе — это, пожалуй, самый забавный вариант РЖД.

Мне очень понравилась 16-летняя девочка, которая когда-то давно выставляла на Ответах этот вопрос, но со временем эта ссылка перестала быть рабочей. И когда я прошёл тест, то провокационные ответы, в которых я изменял своей жене с Вадиком, ушли администрации сайта «3 поросёнка» , а не ей на почту, потому и пришлось действовать по плану «Б».

Это была маленького роста девушка, с явно дерзким характером и очень миленькая. По национальности она похожа на хохлушку. Меня очень возбудило фото, где она лежит в моей любимой позе на животе, на диване, подогнув ножки таким образом, что отлично видны её маленькие подошвы ножек. Я начал дрочить на её небесные пальчики и божественные пяточки. Так как она маленького роста и у неё маленький размер стопы, то у неё очень выразительные и яркие линии изгибов пяточек, подушечек и пальчиков. В общем это были самые красивые ножки из всех девичьих ног, на которые я дрочил. Я написал ей в Агент…

Привет

[email protected] ru Приветик)

[email protected] ru Слушай, я тут случайно на твоём секс-тесте!!! Удали пожалуйста результаты теста!!!! ! [email protected] ru Мм: прикольно;) ) ) ) ) ) )

[email protected] ru Умоляю!!!!!! Удали!!!! ! Этого никто не должен знать!!

[email protected] ru Э: я посмотрела, а мне ничего не пришло)

Сейчас кому-то наверняка показалось, что это конец, но нет, это ещё не конец. Девушки, вообще, долго соображают в этом плане, поэтому надо дать чуть-чуть времени на осмысление ситуации. Она должна осознать, что я боюсь и на этом можно сыграть.

[email protected] ru Не пришло?) ) ) Фух:

Это тоже очень сложный ход, долго объяснять психологический аспект данного хода.

[email protected] ru Нет, не пришло: 😉 )

[email protected] ru Ладно, если придут, то удали ок??????? !

[email protected] ru Ок) А чего ты так боишься?

[email protected] ru Да, если кто-то это узнает, то я сгорю от стыда. Я на всё готов лишь бы никто не узнал.

[email protected] ru А что там?

[email protected] ru Не скажу, извини)

[email protected] ru Ладно, если придёт, то сама почитаю. .

[email protected] ru Удали!!!!!!

[email protected] ru Ок)

Я понял, что надо ждать. Я подождал около часа и написал ей снова.

[email protected] ru Не пришло??????????

[email protected] ru Пришло. Я в шоке. .

[email protected] ru В смысле???????

[email protected] ru Теперь я всё знаю! Я была в шоке когда прочитала результаты. . — Господа Читатели! Аплодисменты принимаются только стоя.

[email protected] ru Удали!!!! !

[email protected] ru Мм. . пока не буду. .

[email protected] ru Ну пожалуйста удали!!!!!!

[email protected] ru А если это кто-нибудь узнает?

[email protected] ru Не надо чтобы кто-то узнал!!!! !

[email protected] ru Ммм. . А если я расскажу?

[email protected] ru Не делай этого!!!! Пожалуйста!!!!!!!!!!

[email protected] ru Успокойся! Я пока никому ничего не буду говорить, но и молчать просто так не собираюсь)

[email protected] ru А что ты хочешь???????????????? ?

[email protected] ru Ты предлагай, а я подуаю)

[email protected] ru Ты хочешь, чтобы я заплатил?

[email protected] ru 10. 000

[email protected] ru Хорошо

[email protected] ru Ок. Кинешь мне на Яндекс-деньги ************

[email protected] ru Ладно! Ты обещаешь молчать??????? ?

[email protected] ru Пока да

[email protected] ru В смысле пока??????????

[email protected] ru Пока у меня нет причины открывать твою страшную тайну.

[email protected] ru Ладно. Я кину!!!

[email protected] ru Здорово)

[email protected] ru Всё

[email protected] ru Нет!

[email protected] ru Что ещё?

[email protected] ru Мне надо реферат сделать, причём очень срочно!

[email protected] ru И что?!!!!!!

[email protected] ru Ты же мне его сделаешь?

[email protected] ru Ты шантажистка и вымогательница!!!!!!

[email protected] ru Ахаха: И что? Ты же знаешь что будет, если ты не сделаешь. .) ) Так что, ты будешь делать всё, что я скажу, иначе я просто перестану молчать. Сам думай, милый;)

[email protected] ru Может тебе ещё носки постирать??

[email protected] ru Если надо будет, то ты постираешь не только носки и не только мне*)

[email protected] ru Ладно!!! Я сделаю!

[email protected] ru Умничка) Сейчас напишу что тебе надо сделать:

Продолжение следует:

«Чем больше я овечка, тем больше она волк» , принцип РЖД. 2011 [email protected]

Три поросенка-2 – Кровь5

Три поросенка-2

Русская мотивирующая сказка

Жили-были три поросенка. Три брата. Все одинакового роста, круглые, розовые, с пятачками и хвостиками. Звали их Тум-Тум, Там-Там и Константин Эдуардович.

Поросята жили хорошо. Каждый день они грелись на солнце, скакали по траве и отдыхали в лужах.

В том же лесу жил большой Серый Волк. Он давно мечтал полакомиться поросятами, но никак не мог их перехитрить. Однажды утром он, как обычно, решил съесть всех трех братьев. Волк прибежал к домику Тум-Тума, сделанному из соломы. Он хотел дунуть на домик, чтобы тот разлетелся, но вдруг почувствовал, что физически не может этого сделать.

Волк испугался, но все же пошел к домику Там-Тама, сделанному из прутьев и ветвей. Он попытался разрушить конструкцию лапами, но не смог сдвинуть даже небольшую щепку.

К каменной избушке Константина Эдуардовича Волк даже не стал ходить. Он вернулся в свою нору, лег и завыл.

Поросята очень обрадовались. Они привыкли, что злодей строит им козни, подстерегает на каждом шагу и угрожает их личной безопасности. От радости они стали кувыркаться так, что забрызгали грязью Константина Эдуардовича. Тот сидел под дубом и думал.

— Что-то мне это не нравится, — сказал Константин Эдуардович.

— Что? — спросил Тум-Тум и перекувырнулся.

— Что конкретно? — уточняюще взвизгнул Там-Там.

— Поведение, — ответил брат. — Это нехарактерно для Волка.

— Подумаешь! — сказал Там-Там.

— Он всегда так себя ведет! — пожал плечами Тум-Тум.

— А вдруг он заболел? — спросил Константин Эдуардович. — Если это, не дай бог, онкология? Надо навестить его.

— Ты лучше вспомни, как он притворялся овцой! — хрюкнул Там-Там. — Мы чуть не погибли!

— Лично я никуда не пойду! — заявил Тум-Тум и лег в лужу.

Константин Эдуардович встал, отряхнулся и сказал:

— Братья! Мы поросята, но не свиньи. Надо помогать друг другу. Не хотите — оставайтесь тут. А я узнаю, что с Волком.

И пошел. К сожалению, Константин Эдуардович оказался прав: Волку диагностировали острый миелобластный лейкоз. Несколько курсов химиотерапии не помогли.

— Надо искать донора костного мозга, — сказал как-то братьям Константин Эдуардович. К тому времени в лесу уже наступила осень. Листва облетала с деревьев.

— Еще чего! — закричал Тум-Тум. — Это больно!

— И страшно! — добавил Там-Там. — Я не хочу остаться инвалидом ради какого-то Волка!

И они захрюкали так, что Константин Эдуардович зажал уши. А на другое утро, пока братья скакали по лужайке, он пошел по лесу, негромко напевая песенку:

Волку нужен костный мозг, костный мозг, костный мозг,
Чтобы вылечить лейкоз,
Острый миелобластный злой лейкоз!

Так он пел, и на эту песенку откликались все обитатели леса. Они выглядывали из своих гнезд и нор, а Константин Эдуардович рассказывал им, какая беда приключилась. Он также объяснял лесным жителям, что такое костный мозг, зачем он нужен, как его пересадка может спасти Волка и какая редкая это вещь — совпадение донора и реципиента по фактору тканевой совместимости, или по HLA-фенотипу.

— Чем больше лесных жителей войдут в регистр потенциальных доноров костного мозга, тем больше шансов, что Волку удастся найти донора и спасти! — толковал Константин Эдуардович и чертил на песке схему работы аппарата для афереза.

Все звери, птицы и даже насекомые удивлялись, как активно развиваются в лесу медицинские технологии. И, конечно, с радостью сдавали кровь и вступали в регистр, тем более что Константин Эдуардович повторял: такая беда может случиться с каждым. И тогда кто-то другой придет и спасет его.

Последними в регистр вступили Тум-Тум и Там-Там.

— Прости, Константин Эдуардович, — сказали они брату. — Мы и правда вели себя как свиньи. Больше не повторится.

Самое удивительное, что Волку нашли донора за месяц. У этого донора взяли немного костного мозга (стволовых кроветворных клеток) из гребня подвздошной кости и пересадили Волку в течение 72 часов. Серый Волк остался жив. Наступила ремиссия, а потом он совершенно поправился. Надо сказать, что у него изменилась не только группа крови, но и характер. Он перестал методично есть поросят,  начал собирать орехи и даже пытался скакать по деревьям, но выходило у него не очень хорошо. Зато появилось время тренироваться.

А свой каменный домик Константин Эдуардович решил передать под нужды НКО. Чтобы заниматься развитием донорства костного мозга в других лесах. Его братья и сам Волк одобрили эту идею. Они сделали в домике ремонт, и когда он закончился, все хором запели:

Вот готов уютный дом,
Новый дом, добрый дом,
Некоммерческая организация по привлечению добровольцев в регистр доноров костного мозга будет в нем,
Будет в нем, будет в нем!

Так и получилось. А кто стал донором для Волка — мы пока не имеем права говорить. Все узнают об этом только через два года.

Тесты по свиноводству с ответами

Тема: Кормление молодняка свиней

правильные ответы отмечены  +.

Вариант – 1

1.  Выберите возможную длительность подсосного периода

+1.  60 дней

2.  26 дней

3.  45 дней

4.  35 дней

5.  25 дней

2.  Укажите, какая живая масса должна быть у поросят в возрасте 60 дней

1.  13-15 кг

2.  17-20 кг

+3.  10-12,5 кг

4.  5-6 кг

3.  Когда наступает второй критический период выращивания поросят:

+1.  на 5-7 сутки выращивания

2.  в первые 2-3 суток после рождения

3.  сразу после отъема поросят от свиноматки

4.  на 10 день после рождения

4.  Из-за дефицита железа в молозиве свиноматки у поросят развивается:

1.  диспепсия

+2.  анемия

3.  авитаминоз

4.  остеопороз

5. Выберите, к каким соскам подсаживают более слабых поросят

+1. к передним

2. к задним

3. не имеет значения к каким

6.С какого возраста поросят приучают к употреблению коровьего молока:

1.  11-20 дней

2.  с 1 месяца

+3.  с 5-10 дней

4.  с 10-15 дней

7. Тесты. Какие привесы должны быть у поросят в возрасте от 2-х до 4-х месяцев:

1.  700-800 гр

+2.  400-450 гр.

3.  150-200 гр.

8.От чего зависит потребность ремонтного молодняка в питательных веществах:

1.  от живой массы

2.  пола

+3.  возраста

4.  среднесуточных приростов

5.  направления продуктивности

9.К какому возрасту поросятам начинают давать морковь:

1.  к 3 дню

2.  с 10-15 дней

+3.  с 1 месяца

Тест 10.Какое количество молока скармливают поросенку за 2 месяца

+1.  30-40 кг

2.  50-60 кг

3.  20-30 кг

Тесты по свиноводству с ответами

Правильный ответ выделен жирным шрифтом: А)

1) От чего зависит потребность свиней в Переваримом

Протеине:

А) от физиологического состояния

Б) от возраста и живой массы

В) от физиологического состояния и живой массы

Г) от возраста и живой массы

2) Избыток жира приводит к:

А) ухудшается рост и развитие

Б) ухудшается мясо и сало

В) ухудшается активность ферментов

Г) ухудшается продуктивность

3) Недостаток витамина Е приводит к:

А) понижается воспроизводительная способность

Б) ухудшается рост

В) рахит, остеомаляция

Г) ухудшается продуктивность

4) Какие элементы входят в состав гемоглобина?

А) фосфор и кальций

Б) железо и медь

В) йод и сера

Г) стронций и свинец

5) Какой процент от

годового расхода кормов (по питательности) приходится на зерновые корма?

А)60-70%

Б)40-50%

В)70-80%

Г) 50-80%

6) При скармливании кормов животного происхождения у хряков улучшается:

А) живая масса

Б) качество спермы

В) продуктивность

Г) экстерьер

7) Содержание сочных кормов в рационе свиней?

А) 10-20%

Б) 40-70%

В) 20-40%

Г) 70-80%

8) Какие корма скармливаются в большинстве при умеренно—концентратном типе?

А) корнеплоды, силос, пищевые отходы

Б) дерть и люцерна

В) ячмень и пшеница

Г) сенаж, солома, люцерна

9) Когда наиболее эффективно применять антибиотики?

А) весной

Б) летом

В) зимой

Г) осенью

тест 10) В чем выражают потребность свиней при умеренно—концентратном типе кормления?

А) в %

Б) в граммах

В) в днях

Г) в к. ед. и переваримом протеине

11) Процент воды в тканях новорожденных поросят:

А) 75%

Б) 82%

В) 60%

Г) 55%

12) На сколько градусов понижается температура тела поросят за первые 30 минут жизни?

А) на 1,5-2оС

Б) на 5-6оС

В) на 10оС

Г) не повышается

13) Что ежедневно получают поросята с молозивом?

А) пестициды

Б) белок

В) лизин

Г) антибиотики

14) Какой объем желудка у новорожденных?

А) 1 литр

Б) 5 литров

В) 25-30 мл

Г) 5 мл

15) Сколько молока поросята получают за сутки от матки?

А) 1 литр

Б) 300-500 мл

В) 50-100 мл

Г) 500-800 мл

16) Какая температура должна быть в помещении для проведения опороса?

А) 22-24С

Б) 18-19С

В) 15-16С

Г) 0-5С

17) Какова продолжительность опороса?

А) 1,5 – 6 часов

Б) два дня

В) 30 минут

Г) 2-3 часа

18) На каком расстоянии у новорожденных перерезают пуповину?

А) 30 см

Б) 4-5 см

В) 40 мм

Г) 1 м

19) В каком возрасте отнимают поросят?

А) 28 дней

Б) 60 дней

В) 1 год

Г) 2 дня

тест№ 20) Количество сочных кормов для подсосных маток на зимний период:

А) 10%

Б) 25-35%

В) 50-60%

Г) 80-90%

21) Один из неблагоприятных факторов, влияющий на поросят при отъеме:

А) понижение температуры

Б) повышение температуры

В) изменение кормления

Г) изменение влажности

22) Сколько кормовых единиц должно содержаться в суточном рационе отъемышей 60-дневного возраста?

А) 20 к. ед.

Б) 12 к. ед.

В) 3 к. ед.

Г) 1,5 к. ед.

23) Какова должна быть молочность матки при отъеме ремонтного молодняка?

А) 48-50 кг

Б) 100- 102 кг

В) 98-100 кг

Г) 10-15 кг

24) На что не обращают внимание при отборе ремонтного молодняка?

А) экстерьер

Б) конституция

В) характер

Г) живая масса

25) В каком возрасте вторично осматривают ремонтный молодняк?

А) 1 год

Б) 1,5 года

В) 4 месяца

Г) 2 месяца

26) Сколько должны весить свинки к 9-месячному возрасту в племенных хозяйствах?

А) не менее 200 кг

Б) не более 100 кг

В) не менее 120-130 кг

Г) не менее 150-160 кг

27) Какое количество к. ед. должно быть затрачено при живой массе ремонтного молодняка

до 60-70 кг?

А) 4-5 к. ед.

Б) 7-8 к. ед.

В) 1-2 к. ед.

Г) 2-3 к. ед.

28) Основной корм для молодняка:

А) пивные дрожжи

Б) смесь зерна

В) сосиски

Г) сочные корма

29) Какое количество кормов должно приходится на долю сочных кормов в рационах ремонтного молодняка?

А) 50-60%

Б) 5-10%

В) 40-41%

Г) 20-25%

30тест) В каком количестве ремонтному молодняку скармливают грубые корма?

А) 5%

Б) 27%

В) 35%

Г) 50%

31) При интенсивном откорме к 7-8 мес. свиньи достигают массы:

А) 50-55 кг

Б) 60-70 кг

В) 100-120 кг

Г) 200 кг

32) От чего зависит рентабельность свиноводства?

А) улучшения содержания

Б) возраста при отъеме

В) содержания малопродуктивных свиней

Г) все ответы не верны

33) Какое животное имеет высокую скороспелость и хорошие показатели оплаты кормов продукцией?

А) здоровое

Б) взрослое

В) больное

Г) красивое

34) Сколько периодов включает в себя откорм?

А) два

Б) три

В) пять

Г) десять

35) Какой из факторов не является последствием кастрации?

А) спокойствие

Б) высокий прирост живой массы

В) увеличение воспроизводительной способности

Г) высокий убойный выход

36) При содержании свиней большими группами в одной секции – с/с прирост:

А) увеличивается

Б) остается прежним

В) уменьшается

Г) повышается в два раза

37) В станке размещают по:

А) 25-30 голов

Б) 2-5 голов

В) 109-110 голов

Г) 45-50 голов

38) Свиней отправляют на убой после достижения ими живой массы:

А) 70 кг

Б) 72 кг

В) 50 кг

Г) 90 кг

39) Какой с/с прирост является наиболее выгодным при интенсивном откорме свиней?

А) 300-400 г

Б) 250-300 кг

В) 400-500 кг

Г) 600-700 кг

40″тест) В каком возрасте заканчивают беконный откорм?

А) 6-7 месяцев

Б) 1 год

В) 3-4 месяца

Г) 9-10 месяцев

41) Что не учитывают при отборе свиней?

А) состояние здоровья

Б) продуктивность

В) скороспелость

Г) длину хвостика

42) Когда бонитируют свиней?

А) в январе – феврале

Б) в июле – октябре

В) в марте – мае

Г) зимой

43) По какой шкале оценивают экстерьер свиней?

А) по 5-ти бальной

Б) по 10-бальной

В) по 12-бальной

Г) по 100-бальной

44) У маток после получения от них приплода учитывают:

А) внешний вид

Б) молочность

В) число поросят

Г) размер ушей

45) По скольким показателям оценивают потомство хряков после контрольного откорма?

А) по 9

Б) по 6

В) по 4

Г) по 5

46) При близкородном спаривании, продуктивность:

А) уменьшается

Б) увеличивается

В) исчезает

Г) остается прежней

47) Какой из приемов подбора свиней широко используется?

А) близкородное спаривание

Б) умеренное родственное спаривание

В) отдаленное родственное спаривание

Г) все ответы не верны

48) Какой опрос считается аварийным?

А) который произошел во время аварии

Б) в котором менее 6 поросят

В) в котором меньше 4 поросят

Г) в котором все поросята родились мертвыми

49) Что получает животное после бонитировки?

А) серийный номер

Б) оценку

В) конфетку

Г) корм

№50) При отборе по качеству потомства не учитывают:

А) скороспелость

Б) мясные качества

В) репродуктивные качества

Г) живую массу

Три поросенка | Сказки на картоне. Познавательная литература

Три поросенка | Сказки на картоне. Познавательная литература

Вы выключили JavaScript. Для правильной работы сайта необходимо включить его в настройках браузера.

0.0261400403 c

79 р

Товара нет в наличии

Shop

4 Быстрая покупка со сроком доставки до 4 дней. В таких покупках не нужно ждать, когда подтвердят заказ. Вы оформляете заказ и сразу оплачиваете его.

4503 отзыва

Книги на КАРТОНЕ, 15 х 21 см, 8 стр, цельнокрытые

Серия «100 развивающих наклеек» Уважаемые родители! Эта книжка с наклейками предназначена для самых маленьких читателей. Уже в 1 го… Автор: И. Гурина; художник: иллюстрации: Hemma Editions – Belgium Мягкая обл., формат: 19,5х26 см;… Книги на КАРТОНЕ, 15 х 21,5 см, 8 стр, цельнокрытые Xудожник: И. Приходкин Книжка на картоне; формат: 16х16 см; 10 цв.стр. + цв.обл. Xудожник: И. Приходкин Книжка на картоне; формат: 16х16 см; 10 цв.стр. + цв.обл. Xудожник: И. Приходкин Книжка на картоне; формат: 16х16 см; 10 цв.стр. + цв.обл. Книги на КАРТОНЕ, 15 х 21 см, 8 стр, цельнокрытые Эта яркая книжка поведет детей в чудесный мир чтения. На страницах издания маленьких читателей ждут… Серия «Корней Чуковский с развив. заданиями» Формат: 17 х 21,5 см; 16 цв.стр. с обл.

Разработка тест-системы для обнаружения и дифференциации цирковируса свиней 2-го типа подтипов 2а и 2b на основе множественной ПЦР в реальном времени Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Разработка тест-системы для обнаружения и дифференциации цирковируса свиней 2-го типа подтипов 2а и 2Ь на основе множественной ПЦР в реальном времени

О.В. Елисеева1, кандидат биологических наук, О.Е. Латышев1, кандидат биологических наук,

О.Н. Зайкова3, А.Д. Булгаков2, Т.В. Гребенникова13, доктор биологических наук,

Е.А. Непоклонов2, доктор биологических наук

1 НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского Минздрава России (Москва).

2 Московский государственный университет пищевых производств (Москва).

3 Научно-исследовательский институт диагностики и профилактики болезней человека и животных (Москва).

Ключевые слова: множественная ПЦР в реальном времени, ПЦР диагностика, подтипы ЦВС-2а/Ь, цир-ковирус свиней 2 типа

Сокращения: ВГС — вирус гриппа свиней, ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота, КЧС — классическая чума свиней, ПВС — парвовирус свиней, ПЦР-РВ — полимеразная цепная реакция в реальном времени, РНК — рибонуклеиновая кислота, РРСС — репродуктивно-респираторный синдром свиней, СДНС — синдром дерматита и нефропатии свиней, СПМИ— синдром послеотъемного мультисистемного истощения, ЦВБС — цирковирусная болезнь свиней, ЦВС-2 — цирковирус свиней 2-го типа

Введение

Цирковирусная болезнь свиней широко распространена в странах с развитым свиноводством и причиняет большие экономические убытки хозяйствам. Возбудитель — ЦВС-2; его обнаруживают при СПМИ, СДНС, репродуктивных нарушениях, респираторных болезнях свиней. В ходе массовых серологических исследований, проводимых в странах с развитым свиноводством (Бельгия, США, Канада, Испания, Германия, Великобритания), антитела к ЦВС-2 выявляются в 30.. .85 % исследуемых проб, что подтверждает широкую распространенность вируса в популяции свиней [5].

СПМИ поражает, в основном, поросят в возрасте 2.3 месяцев; характеризуется отставанием животных в росте, диареей, отдышкой, истощением, увеличением поверхностных лимфатических узлов, бледностью и иктеричностью слизистых оболочек и кожи. В различных хозяйствах заболеваемость обычно составляет 5.30 %, а смертность 4.20 % [7]. С возрастом у поросят увеличивается резистентность к СПМИ. Источником возбудителя инфекции служат больные и инфицированные свиньи всех возрастных групп, выделяющие вирус со слюной, носовыми и глазными секретами, молоком, мочой, фекалиями. В наибольших количествах вирус накапливается в печени, тимусе, селезенке и лимфоузлах. Наличие ассоциированных заболеваний, вызванных вирусом РРСС, ПВС, ВГС, а также PasteшeUa multocida,

Micoplasma hyopneumoшae, может осложнять течение СПМИ [1].

СДНС выявляется, как правило, у поросят в возрасте 1,5.4 мес, редко у взрослых свиней. Заболеваемость составляет около 1 %, летальность 70.100 % [6]. Клинически СДНС характеризуется угнетением, состоянием прострации, потерей аппетита, могут появляться красные некротические поражения кожи в области промежности и задних конечностей. Наиболее сильно поражаются почки: они плотные, увеличенные; иногда на вскрытии обнаруживают кровоизлияния, отечность почечной лоханки.

Репродуктивные нарушения при ЦВБС характеризуются рождением мертвых и слабых поросят, абортами во второй половине беременности. К репродуктивным нарушениям у свиней, обусловленным ЦВБС, можно отнести 10.20 % всех случаев инфекционной природы [2]. Зараженные хряки выделяют вирус вместе со спермой более 6 мес.

ЦВС-2, наряду с вирусами РРСС и ВГС, относится к основным возбудителям респираторных болезней свиней. В подавляющем большинстве случаев при респираторных поражениях свиней обнаруживается не один, а два (76.88 %) или даже 3 (28.33 %) вирусных патогена [3].

ЦВС-2 относится к роду Circovirus семейства Сгг-соviridае. Это мелкий безоболочечный икасаэдрический вирус, содержащий замкнутую односпиральную геномную ДНК размером около 1767 нуклеотидов. Не обладает гемагглютинирующей активностью, устойчив к инактивации посредством хлороформа и сохраняет инфекционность при 70 °С в течение 15 мин, стабилен в кислой среде (при рН 3). Диаметр вириона 16.21 нм. Капсид состоит из 32 капсомеров. В вирионах ЦВС-2 выявлен только один белок с молекулярной массой 30 кД, состоящий из 233 аминокислот [4]. Помимо патогенного ЦВС-2 известен непатогенный ЦВС-1, который был обнаружен как нецитопатогенный контаминант перевиваемой культуры клеток почки поросенка РК-15. Гомология между ними составляет 76 %. На основании генетических различий в области второй открытой рамки

Разработка тест-системы для обнаружения и дифференциации цирковируса свиней 2-го типа подтипов 2а и 2Ь на основе множественной ПЦР в реальном времени

считывания (ORF2) ЦВС-2 подразделяют на два подтипа: 2а и 2b. Тяжесть, с которой часто протекает ЦВС-2, многие исследователи связывают с переходом от ЦВС-2а к ЦВС-2Ь [6].

Диагноз базируется на трех критериях: клинической картине, эпизоотологических данных, результатах лабораторного исследования. Методы лабораторной диагностики основаны на обнаружении вируса или вирусного антигена в тканях и органах поросят с помощью ПЦР и ПЦР-РВ, гибридизации in situ, иммуногистохимии, непрямой иммунофлуоресценции [7]. При проведении исследований на обнаружение вирусного антигена в качестве материала используют сыворотку крови, сперму хряков, кусочки легких, печени, почек, селезенки, абортивные плоды.

В настоящее время важно не только обнаружить самого возбудителя ЦВБС, но также и его типиро-вать, что помогает прогнозировать характер и остроту течения заболевания, а также правильно выбрать профилактические препараты. Такое типирование возможно с использованием молекулярных методов анализа.

Цель исследования

Разработать тест-систему для обнаружения и дифференциации ЦВС-2а и ЦВС-2Ь на основе множественной ПЦР-РВ.

Материалы и методы

Исследуемые образцы. Для разработки тест-системы и проведения ПЦР-РВ использовали ЦВС-2 шт. «ISU-31», 20%-ю суспензию паренхиматозных органов мертворожденных, павших и вынужденно убитых просят, кровь поросят в возрасте 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 14 недель, сыворотку крови поросят в возрасте 50.70 дней, полученные из свиноводческих хозяйств РФ (Владимирская область, Московская область, Сибирь, Дальний Восток). Для исследования специфичности тест-системы использовали вирус КЧС вакцинный шт. «КС», вирус РРСС шт. «Lelystad», «NADC-2», ПВС шт. «Ил-82», ВГС шт. «А A/swine/HongKong/9/98», «A/Moscow/01/09 swine-like».

Выделение ДНК. Для выделения ДНК из вируссодержащей культуры клеток РК-15, органов и тканей, сывороток крови свиней использовали специальный набор с неорганическим сорбентом (ООО «Ветбиохим», Россия).

Праймеры и зонды. Нуклеотидную последовательность референтных штаммов ЦВС-2 подтипов 2а и 2b анализировали с использованием информационной базы данных GenBank при помощи программ Assem-blyLign, Oligo 4.0, BioEdit 7.0.1 (США). Специфические олигонуклеотиды для обнаружения и дифференциации ДНК ЦВС-2 подтипов 2а и 2b подбирали на участок генома ЦВС-2, кодирующий капсидный белок (ORF2). Специфические олигонуклеотиды для дифференциации ЦВС-2 подтипов 2а и 2b (зонды) метили на 5′-конце флуорофорами HEX и ROX, соответственно. На З’-конце оба зонда метили гаситетелем флуоресценции BHQ2.

Множественная ПЦР-РВ. Реакцию проводили в объеме 25 мкл. Реакционная смесь содержала 10 ммоль Tris-HCl (pH=9,0), 50 ммоль KCl, 0,1% Triton X-100, 1,5 ммоль MgCl2, 10 пмоль каждого праймера, 5 пмоль каждого зонда, 0,25 ммоль каждого dNTP, 1,25 ед. Taq-полимеразы и 5 мкл матрицы ДНК. Использовали следующий температурно-временной режим: 50 °С — 2 мин, 95 °С — 10 мин; 40 циклов: 95 °С — 15 с, 60 °С — 1 мин. Детекцию флуоресцентного сигнала осуществляли при 60 °С в течение 1 мин.

При постановке множественной ПЦР-РВ и учете результатов использовали детектирующий амплифика-тор ДТ-96 (НПО «ДНК-Технология», Россия).

Результаты

В настоящее время для диагностики заболеваний, вызванных ЦВС-2, используют методы ПЦР и ПЦР-РВ. Оба метода высокочувствительные и специфичные. Однако ПЦР-РВ обладает рядом преимуществ по сравнению с обычной ПЦР: сокращает время анализа и снижает риск контаминации. Вариант множественной ПЦР-РВ позволяет одновременно выявлять и дифференцировать подтипы ЦВС-2. Была разработана диагностическая тест-система для выявления и дифференциации ДНК ЦВС-2 подтипов 2а и 2b на основе множественной ПЦР-РВ.

Для исследования чувствительности разработанной тест-системы были взяты пробы полевого материала (№1, №2), содержащие ДНК ЦВС-2а и ЦВС-2Ь, соответственно. Концентрацию ДНК в исследуемых пробах определяли с помощью количественной ПЦР-РВ для обнаружения ДНК ЦВС-2. Концентрация ДНК в пробе №1 составила 5,34×105 копий/мл, в пробе №2 —

4,06×10 копий/мл.

Далее готовили разведения исследуемых проб и проводили ПЦР-РВ для выявления и дифференциации ДНК ЦВС-2 подтипов 2а и 2b. Пределом чувствительности считали последнее разведение ДНК, при котором наблюдали положительный результат ПЦР-РВ (табл. 1).

1. Чувствительность тест-системы для выявления и дифференциации ДНК ЦВС-2 подтипов 2а и 2Ь на основе множественной ПЦР-РВ

Исследуемый Наличие ДНК ЦВС-2

образец Подтип 2а Подтип 2b

Проба №1 (неразведенная) + —

1:5 + —

1:25 + —

1:50 + —

1:100 + —

1:500 + —

1:1000 — —

Проба №2 (неразведенная) — +

1:5 — +

1:25 — —

1:50 — —

1:100 — —

1:500 — —

1:1000 — —

РВЖ • СХЖ • № 3/2013

О.В. Елисеева, О.Е. Латышев, О.Н. Зайкова, А.Д. Булгаков, Т.В. Гребенникова, Е.А. Непоклонов

Результаты исследований показали, что чувствительность множественной ПЦР-РВ для выявления и дифференциации ЦВС-2 подтипов 2а и 2Ь составляет:

1,07×10 копий/мл для подтипа ЦВС-2а и 8,12×10 копий/мл для подтипа ЦВС-2Ь. Данная чувствительность является достаточной для выявления и дифференциации ЦВС-2 в материале от животных.

Для исследования специфичности проводили множественную ПЦР-РВ, используя материал, содержащий РНК и ДНК вирусных патогенов, вызывающих сходные с ЦВС-2 клинические признаки: ПВС, вирус РРСС, вирус КЧС, ВГС. В качестве положительного контроля на наличие ДНК ЦВС-2 подтипа 2а использовали пробу №1, а на наличие ДНК ЦВС-2 подтипа 2Ь — пробу №2. Отрицательным контролем служил физиологический раствор (таблица 2).

Результаты исследований показали, что специфичность исследуемой тест-системы составила 100 %. Болезни сельскохозяйственных животных. — Минск: Бизнесофсет, 2005.

2. Орлянкин Б.Г. Инфекционные респираторные болезни свиней // Свиноферма, 2006; 10: 60-62.

3. Орлянкин Б.Г., Мишин AM., Aлипер Т.И. Специфическая профилактика цирковирусных болезней свиней // Свиноводство, 2011; 2: 67-68.

4. Тимина A.M., Щербаков A.B., Ковалишин В.Ф. Выявление и дифференциация цирковирусов свиней методом мультиплексной ПЦР

□ отрицательные пробы 00 0

Рис. Обнаружение и типирование проб от животных на наличие ДНК ЦВС-2 подтипов 2а и 2Ь

ческих хозяйств РФ были предоставлены 73 пробы цельной крови поросят 2.12-недельного возраста, образцы сывороток крови поросят 50.70-дневного возраста, пробы органов и тканей от животных. Данные пробы были типированы на ЦВС-2 подтипы 2а и 2Ь с помощью разработанной тест-системы на основе ПЦР-РВ (рис.). Полученные нами данные подтверждают большее распространение ЦВС-2 подтипа 2Ь по сравнению с подтипом 2а в популяции животных на территории РФ.

Выводы

Таким образом, результаты исследования показали, что разработанная тест-система для выявления и дифференциации ЦВС-2 подтипов 2а и 2Ь на основе множественной ПЦР-РВ обладает высокой чувствительностью, специфичностью и может быть использована для лабораторной диагностики с целью одновременного выявления или дифференцирования ДНК ЦВС-2 в пробах биологического материала разного происхождения.

// Труды Федерального центра охраны здоровья животных, 2006; 4: 91-101.

5. Gillespie T., Opriessnig T., Meng X.J. et. al. Porcine circovirus type 2 and porcine circovirus-associated desease // J. Vet. Intern. Ved., 2009; 23:1151-1163.

6. Segales J. Porcine circovirus type 2 (PCV2) infections: Clinical signs, pathology and laboratory diagnosis // Virus Res., 2012; 164: 10-19.

7. Trible B.R., Rowland R.R.R. Genetic variation of porcine circovirus type 2 (PCV2) and its relevance tovaccination, pathogenesis and diagnosis // Virus Res., 2012; 164: 68-77.

2. Cпецифичность тест-системы на основе множественной ПЦР РВ для выявления и дифференциации ЦВС-2 подтипов 2а и 2Ь

Исследуемый образец ПЦР-РВ для дифференциации ЦВС-2 a/b a b

Культура клеток ППЭС, зараженная ПВС — —

Культура клеток MARC-15, зараженная вирусом РРСС — —

Культура клеток РК-15, зараженная вирусом КЧС — —

Культура клеток MDCK, зараженная вирусом гриппа свиней — —

Проба №1 + —

Проба №2 — +

Физиологический раствор — —

Summary

O.V. Eliseeva, O.E. Latyshev, O.N. Zajkova, A.D. Bulgakov, T.V. Grebennikova, E.A. Nepoklonov. Development of the Kit for Detection and Differentiation of Porcine Circovirus Type 2 Subtypes 2a and 2b Based on Multiplex Real Time PCR. Porcine circovirus-2 (PCV-2) is associated with several diseases in pig: postweaning mul-tisystemic wasting syndrome, porcine dermatitis and nephropathy syndrome, reproductive failure and porcine respiratory disease complex. The kit for detection and differentiation subtypes PCV-2a and PCV-2b based on multiple real-time PCR has been developed. High sensitivity and specificity of the kit allows the analysis of samples from animals and use in laboratory diagnosis.

The three little Pigs | Английский язык

The three little Pigs	Три поросёнка
The three little pigs are brothers.	Три поросёнка (родные) братья.
They are going into the forest.	Они направляются в лес.
They want to build three houses.	Они хотят построить три дома(домика).
«Let’s build our houses here,»	«Давайте построим наши дома здесь»
says the first little pig, Percy.	говорит первый поросёнок, Перси.
«Yes,» says the second little pig, Peter.	«Да(согласен)» говорит второй поросёнок, Питер.
«That’s a good idea,»	«Это хорошая мысль»
says the third little pig, Patrick.	говорит третий поросёнок, Патрик.
The first little pig, Percy, gets some straw	Первый поросёнок, Перси, собирает солому
and he starts to build a house of straw.	и начинает строить дом из соломы.
He sings, «Hum de hum, dum de dum,	Он поёт: «Хай де хам, дам де дам,
hee de dum, dee de hum,» when he works.	хи де дам, ди де хам» когда(пока) строит.
The second little pig, Peter, gets some wood	Второй поросёнок, Питер, добывает древесину
and he starts to build a house of wood.	и начинает строить дом из дерева.
He sings, «Hum de hum, dum de dum,	Он поёт: «Хай де хам, дам де дам,
hee de dum, dee de hum,» when he works.	хи де дам, ди де хам» когда(пока) строит.
The third pig, Patrick, is very clever.	Третий поросёнок, Патрик, очень умный.
He gets some bricks and he starts to	Он добывает кирпичи и начинает
build a house of bricks.	строить дом из кирпичей.
He sings, «Hum de hum, dum de dum,	Он поёт: «Хай де хам, дам де дам,
hee de dum, dee de hum,» when he works.	хи де дам, ди де хам» когда(пока) строит.
Now all the houses are ready.	И вот все домики готовы(построены).
The three little pigs make a fence and they	Три поросёнка ставят забор и
paint it red.	красят его (в) красным (цвет).

Три поросенка

Лол, у меня 10/10, у меня большой мозг

Кто-то (94936)

903 дня назад

О боже, привет, я люблю лапшу, нет, я ненавижу лаймы, но лимон, лучше перестань драться со мной

Ю Чен (80211)

1195 дней назад

Последний вопрос — Горячий кипящий суп, но почему он? Это не потому, что это Вода!

Hugsandkisses (30530)

1230 дней назад

Я правильно ответил на 8 из 10 вопросов.
Круто! Всем остальным удачной работы! (P.S. Нана, ты СЛИШКОМ САМОСТОЯТЕЛЬНА!!! Ты даже не поздравляешь других. Ты только и делаешь, что поздравляешь себя! Что ты можешь сказать о себе?) (P.P.S. Я думаю, ты лжешь обо всем правильно ответы, которые вы получаете. вы, вероятно, не отвечаете НА ВСЕ ВОПРОСЫ КАЖДЫЙ РАЗ, ОТНОСЯСЬ К ОДНОМУ ИЗ ЭТИХ ВИКТОРИН!) blue>

Фиолетовый лес (72939)

1235 дней назад

Все они были правы, мой брат получил 9 1 лес

Пн 12 (84131)

1246 дней назад

9/10 я получил вопрос 10 неправильно любил викторину военно-морского флота>

легенда (51588)

1262 дня назад

ты знаешь босса он мой младший брат

босс (51588)

1262 дня назад

Я никогда не ошибаюсь, чуваки

босс (51588)

1262 дня назад

Мне пришлось изменить свое имя, потому что я получил 10 из десяти в каждом тесте, потому что я продолжаю делать каждый тест снова и снова, Бьюсь об заклад, НИКТО НЕ ПРОВЕРЯЛ ЭТО, лол

босс (51588)

1262 дня назад

я хуаооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооодоей

Кебран Симс (46338)

1262 дня назад

Ну-ну, я только 8/10 правильно.ВСЕ ПОЕДИТЕ В АД!!!!!

Нана (80240)

1264 дня назад

Боже, еще 10/10, продолжай пробовать, нана

аяуна (37385)

1290 дней назад

yall некоторые lyierys
b

Кэти Мэггс (68650)

1330 дней назад

Было здорово пройти этот тест, я так люблю викторины, спасибо

Фатима (80703)

1417 дней назад

Вау, настоящая игра, красивая игра, фуксия>

Сария (31617)

1529 дней назад

Это испытание было пожарным

уин (45847)

1530 дней назад

хороший тест я люблю проходить тест

судьба (55493)

1561 дней назад

я люблю этот тест я получил 10/10

лиз (62557)

1977 дней назад

Я ЛУЧШИЙ Я ПОЛУЧИЛ 120% !!

айнонамус (74699)

1985 дней назад

это тест или оскорбление

Три поросенка STEM Challenge

Этот три поросенка STEM Challenge является блестящим научным экспериментом для изучения стабильности структур и свойств материалов .Это отлично подходит для Ранние годы науки возраста, но также может быть расширено и для детей старшего возраста.

Если вам это нравится, вам также может понравиться наш Научные эксперименты с Пряничным человечком .

Мы сделали шесть разных типов домиков Три поросенка по сюжету.

Три поросенка STEM Challenge

Вам понадобится

Палочки

Соломинки пластиковые и бумажные

Зефир

Резинки

Картон

Лего

Мягкая бутылка или небольшой вентилятор для использования в качестве ветра

Кубики сахара

Инструкции по тесту STEM «Три поросенка»

В классе я оборудовал 5 разных зон из разных материалов для строительства дома и дал детям изучить каждую зону.

Палочный домик

Мы говорили о свойствах палки, которые сделали ее пригодной для строительства дома. Лучшие палочки были довольно гладкими, без лишнего бугорка и одинакового размера.

Соломенный домик

Я связала соломинки, чтобы их было легче собирать, и чтобы дети придумали, как лучше их сложить.

Сахарный кубик

Этот был самым популярным и надолго занимал детей.Вы можете расширить эту задачу, обрызгав дом водой после завершения или склеив кубики вместе с различными материалами, например, сахарной пудрой, хлопьями зефира или даже просто увлажнив кубики, чтобы посмотреть, приклеятся ли они таким образом.

Стены из бумаги/картона/соломы

Я построил каркас из LEGO, а затем вырезал стены из бумаги и картона для проверки, а также стену, которую можно построить из соломинок. Затем дети использовали мягкую бутылку, чтобы дуть «ветром» на стены, и наблюдали за тем, что происходило.

LEGO/кирпичный дом

Я построил этот дом из LEGO и оставил одну сторону крыши пустой, чтобы дети могли протестировать палочки, рваный картон и плитки LEGO, чтобы определить, какие из них лучше всего защищают от ветра из сжатых бутылок. Я поместил внутрь домика несколько квадратов папиросной бумаги, чтобы детям было видно влияние ветра.

Зефир и соломинки

Детям очень понравился этот, но он стал немного липким, а домики не очень устойчивыми.Меньшие, более твердые сладости и палочки для коктейлей могут работать лучше.

Эти БЕСПЛАТНЫЕ листы дизайна для печати тоже могут пригодиться!

Листы с рисунком домика для трех поросят

Три поросенка Дополнительные задания STEM Challenge

Попробуйте обрызгать каждый дом водой и посмотреть, что произойдет. Можете ли вы делать прогнозы первыми?

Можете ли вы проверить устойчивость домов, встряхнув их?

Из каких еще материалов можно построить дом?

Подходит для Цель раннего обучения 16

Изучение и использование сред и материалов

Они безопасно используют и изучают различные материалы, инструменты и техники, экспериментируя с цветом, дизайном, текстурой, формой и функцией.

Ключевой этап 1 

Товары для повседневного использования

Использование повседневных материалов

Научная работа

Тест торговой системы: 3 поросенка

Как вы все, наверное, уже знаете, торговая система 3 Little Pigs компании Harmonicphil выиграла конкурс на лучшую торговую систему Forex в июле месяце.

Система использует метод, называемый анализом нескольких временных рамок, для открытия свинг-сделок в направлении недельного, дневного и 4-часового графиков.Для определения направления система использует старые добрые простые скользящие средние (SMA).

Важно отметить, что не он разрабатывал систему, а ее представил друг. Проведя собственное тестирование, он решил, что это хорошая система, и решил торговать ею вживую. Это отлично сработало для него, потому что это была долгосрочная система, а это значит, что ему не нужно было проводить слишком много времени перед графиками. Он утверждает, что работает на 8 разных парах.

Параметры обратного тестирования

Таймфреймы: Как я уже говорил, система использует несколько таймфреймов для определения тренда.Он использует 4-часовой, ежедневный и еженедельный.

Индикаторы: Система использует 3 простых скользящих средних, причем каждое простое скользящее среднее применяется к разным временным рамкам. В частности, 55 SMA применяется к недельному графику, 21 SMA — к дневному графику, а 34 SMA — к 4-часовому таймфрейму.

Правила входа:

Покупайте, если 4-часовая SMA закрывается выше 34 SMA И цена выше 55 SMA на недельной и 21 SMA на дневной

Продавать, если 4-часовой график закрывается ниже 34 SMA И цена ниже 55 SMA на недельной и 21 SMA на дневной

Правила выхода:

Стоп-лосс: Будет сделано небольшое изменение, чтобы упростить процесс установки стоп-лосса для новичков.Вместо использования оригинального метода ATR мы будем использовать более простую версию. Стоп — это значение 34-SMA минус 20 пунктов. Однако мы по-прежнему будем использовать метод трейлинг-стопа, который использует гармонифил.

Целевая прибыль: Поскольку эта система предназначена для того, чтобы следовать за трендом и ловить большие пункты, мы будем соблюдать первоначальные правила и держать позицию открытой до тех пор, пока не будет достигнут стоп-лосс.

Пара: EUR/USD

Период тестирования системы: Система будет тестироваться в течение последних 18 месяцев, включая период с января 2012 г. по июнь 2013 г.

Напоминания

Имейте в виду, что мы внесем небольшое изменение в процесс установки стоп-лосса, поэтому результаты могут не на 100% точно отражать результаты, которые Harmonicphil мог собрать за тот же период времени.

Остаток этой недели я проведу, тестируя систему на истории и просматривая цифры. В это же время на следующей неделе я вернусь с результатами, а также с моим системным обзором торговой системы 3 Little Pigs.

Как однажды сказал подобный инопланетный киборг, Хаста Ла Виста, детка!

Тест «Открытое поле» как инструмент для анализа поведения свиней – нужна ли стандартизация настройки? Систематический обзор

Abstract

Тест «Открытое поле» является распространенным инструментом для измерения беспокойства и поведенческих изменений у грызунов.Однако научные результаты экспериментов на грызунах могут неадекватно переноситься на людей, и было показано, что более крупные модели животных могут работать в этом отношении лучше. В результате количество опубликованных исследований, включающих тест «Открытое поле» на моделях домашних свиней, увеличивается. Целью нашего обзора было изучить настройки Open Field в опубликованных исследованиях, а также сходство между производительностью и опубликованными параметрами. Следуя рекомендациям PRISMA для обзоров, мы выбрали 69 исследований для извлечения данных в этом систематическом обзоре.Мы смогли определить конкретные условия настройки, такие как размер, продолжительность и дневное время для большинства включенных исследований, и обнаружили высокую изменчивость в этих спецификациях теста. Результаты указывают на неравномерную производительность настройки, включая размер, время, параметры и дополнительные комбинированные тесты, такие как тест нового объекта. Мы хотели бы указать на необходимость стандартизации теста «Открытое поле» для свиней с целью улучшения результатов, сопоставимости и уменьшения несоответствий.

Введение

Одним из инструментов для оценки результатов лечения является тест «Открытое поле» (OF), который широко используется в моделях на грызунах.Более пристальный взгляд в историю показывает, что OF был впервые разработан Холлом в 1934 году и определен как «незнакомая оболочка» [1]. Предполагалось проанализировать тревожность, поведение или токсикологические эффекты у грызунов. Тем не менее, в контексте конфликтов «подход-избегание» тест OF рекомендуется использовать в сочетании с другими тестами, связанными с тревогой, такими как приподнятый крестообразный лабиринт или тест социального взаимодействия, чтобы сделать убедительное заявление, поскольку сам по себе OF не является достоверным индикатором тревоги. эмоции [2]. Со временем и с развитием технологий ОП стал использоваться также для определения расстояния и скорости в качестве объективных параметров двигательной активности [3, 4].Позже для определения благополучия грызунов были добавлены поведенческие модели, такие как выращивание и уход, поскольку они указывают на уровень стресса [5–7]. У свиней ОП часто комбинируют с тестом на новый объект (НЕ) или тестом на приближение человека (НАТ) [8]. Для НЕ знакомого (нового) предмета обычно подвешивают к потолку, в основном после того, как свинья несколько минут адаптируется к Открытому полю для оценки исследовательской реакции. Для HAT человек, незнакомый свинье, входит в зону открытого поля, и также регистрируется такое поведение, как тревога или любопытство, а также приближение.

Домашняя свинья является широко используемой моделью в нескольких областях биомедицинских исследований [9]. Это также сокращает разрыв между грызунами и людьми с большим генетическим и морфологическим сходством с людьми [10]. Особенно перед адаптацией клинических исследований модель крупного животного может ответить на конкретные вопросы в области хирургических моделей, токсикологии или расстройства головного мозга. Однако поведенческие тесты, установленные у грызунов, не обязательно применимы к свиньям из-за их различной реакции на поведенческие стимулы [11].

Однако существует лишь несколько проверенных методов оценки отвращения к новизне у свиней [12]. Кроме того, животные модели исследований, связанных с болью, включают множество методов для оценки изменений в поведении после боли. Хотя использование грызунов и летающих животных для оценки боли подвергается критике из-за отсутствия трансляционной способности для человека [13–15]. Кроме того, токсикологические исследования на свиньях также использовались для изучения программирования плода [16], антипсихотических препаратов [17, 18] для лечения психических расстройств, таких как шизофрения или зависимость от наркотиков [19].Кроме того, известно, что обогащение окружающей среды оказывает положительное влияние на ранние стадии жизни крыс в отношении сенсорных, социальных, когнитивных и моторных функций [20, 21]. Также исследуется, облегчают ли такие факторы социальное или эмоциональное поведение свиней, воздействуя на окружающую среду. Особенно в отношении сельскохозяйственных животных ОВ может быть мощным инструментом для определения влияния условий содержания на свиней [22–24].

По данным Forkman et al., при переносе теста ОФ на домашних и сельскохозяйственных животных не учитывалась их видовая специфика поведения [25].Грызуны естественным образом проявляют тигмотаксис при воздействии в ОВ, тогда как такое поведение не описано для сельскохозяйственных животных, таких как свиньи. Хотя кабанов можно увидеть бродящими вблизи границы леса, расстояние до деревьев в среднем на 54 м выше, чем тигмотаксическое поведение, и не может быть перенесено на арену ОВ [8]. Таким образом, использование OF в качестве чистого индикатора [24] тревожности следует рассматривать критически [25].

Скрининг литературы показывает широкое и неравномерное использование теста OF у свиней, различающихся по размеру, продолжительности и исходным параметрам.Кроме того, можно было наблюдать отсутствие информации об условиях содержания, животных и проведении поведенческих тестов. Кроме того, поскольку до сих пор нет единого мнения о поведенческих параметрах, имеющих наибольшее значение для эмоционального состояния, влияния на социальную изоляцию или изменение поведения, связанного с болью, мы изучили широкий спектр параметров, использованных в исследованиях, чтобы определить, какие из них наиболее значимы. используется чаще всего.

Таким образом, в этом систематическом обзоре исследуется, может ли быть обнаружено совпадение настроек, производительности и параметров между исследованиями, чтобы дать будущие рекомендации по стандартизации теста OF на свиньях.

Методы

Это исследование проводилось в соответствии с рекомендациями Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA) [26] и проводилось с использованием зарегистрированного протокола Международного проспективного регистра систематических обзоров (PROSPERO, CRD42019156734). ).

Стратегия поиска

Опрос был направлен на выявление опубликованных рукописей с определенными настройками с использованием OF в сочетании с sus scrofa . Мы провели поиск в MEDLINE (Pubmed), EMBASE и Web of Science по различным поисковым запросам, связанным со свиньями, а именно: «свинья», «свинья», «свинья», «кабан», «свинка», «миниатюрная свинья», «свиноматка», «поросенок» и «поросята» и объединили их с терминами для изучения исследований с использованием теста OF для оценки поведения с терминами «открытое поле», «открытое поле» и «поведение*».Условия поиска были одинаковыми для каждой базы данных. Систематический литературный поиск исследований был проведен в ноябре 2019 г. за период с 1967 г. по ноябрь 2019 г. II) исследование было написано на английском языке, (III) виды были ограничены sus scrofa и (IV) в исследовании использовалась OF с новым объектом или без него (NOT) или тест подхода человека (HAT).Мы определили OF как незнакомую, ограниченную среду, включая альтернативные названия, такие как «загон» или «домашний загон», если они используются.

Исследования исключались, если (I) тип публикации был обзором и (II) если исследования еще не были опубликованы. Все ссылки были импортированы в Endnote X9 (Clarivate, Пенсильвания), а дубликаты удалены.

Первичные результаты

• Настройка (измерение, сегменты, продолжительность, дневное время)

• возраст или вес тела животных

вторичные результаты

• время проведены с не, шляпа или злоумышленника

• Параметры, полученные ОВ (т.грамм. подвижность, вокализация, исследовательское поведение)

• Категоризация научных областей избранных исследований

Сбор данных

Два независимых рецензента оценивали с помощью стандартизированной выборочной таблицы приемлемость каждой статьи. Исследования были исключены, когда оба рецензента согласились с тем, что критерии включения не были соблюдены. Третий рецензент не требовался, так как все разногласия можно было решить путем обсуждения.

Риск систематической ошибки

Риск систематической ошибки был описан и оценен в соответствии с инструментом риска систематической ошибки SYRCLE [27], адаптированным из Кокрейновского инструмента риска систематической ошибки (RoB) [28].Исследования будут классифицироваться как низкий, высокий или неясный риск систематической ошибки во всех десяти областях. Три независимых автора оценивали RoB для каждого исследования.

Синтез данных и статистический анализ

Нашим основным результатом были параметры исследования, касающиеся размерности OF, а также фактическая эффективность (использованное время, акклиматизация, NOT и HAT) поведенческих тестов. Кроме того, представляющие интерес параметры представляли собой вторичные результаты, описывающие время проведения теста в течение дня, возраст или массу тела используемых животных, а также исследуемое поведение свиней.Кроме того, были оценены области научных вопросов. Метаанализ не проводился из-за исключительно описательного описания данных. Для корреляции параметров использовалось программное обеспечение Graph Pad Prism 7.0 (Dan Diego, США) с коэффициентом Пирсона и доверительным интервалом 95%. Блочная диаграмма была дана с усами, отображающими доверительный интервал 5-95% и выбросы. Результаты представлены в виде среднего или медианы со стандартным отклонением. Научные области были отображены на радиолокационном графике с помощью visual-paradigm.com.

Результаты

Первоначальный поиск в каждой базе данных дал в общей сложности 379 совпадений.Оба независимых рецензента продемонстрировали высокий уровень согласия, в котором необходимо было обсудить 11 исследований. Реферативный скрининг предоставил 81 исследование. Второе консенсусное собрание с полным соответствием исключило еще 12 исследований из-за критериев исключения. Всего в это исследование было включено 69 исследований. На рис. 1 показан пошаговый процесс проверки.

Рисунок 1

Блок-схема процесса систематического обзора, разделенного на четыре этапа в соответствии с рекомендациями PRISMA

Наши показатели качества в 69 отобранных исследованиях сильно различались.Ключевые критерии были сосредоточены на подробной информации, предоставленной о размере OF, дневном времени эксперимента, животных, спецификациях испытаний (время в OF, количество тестов и т. д.) и этическом одобрении властями.

Таблица 1 Качество и ранжирование исследований на основе предоставленной информации сортирует все исследования по доступной информации, ранжируя исследования с наивысшим качеством выше.

Таблица 1

Качество и ранжирование исследований на основе предоставленной информации

Только три исследования смогли предоставить всю информацию, за которой последовали 25 исследований, соответствующих как минимум 4 из 5 критериев качества.Более половины отобранных публикаций (41 публикация) содержали 3 или менее критериев качества и, следовательно, не содержали информации.

Устройство открытого поля

Размер ОП сильно различался в рамках исследований со средним значением 11,28 м ² и большим стандартным отклонением 8,55 м ² . Два исследования не предоставили информацию о размере их OF [30, 71] (рис. 2). В то время как в большинстве исследований использовалась прямоугольная комната, в двух исследованиях той же группы круглая арена упоминалась как OF [12, 81].Сорок два исследования дали дополнительную информацию о сегментации арен в секциях, независимо от того, применялись ли они физически или виртуально (рис. 3). Медиана используемых разделов составляет 12 ± 13,2.

Рисунок 2:

точки, показывающие длину и ширину ОВ, 27 точек представляют собой квадрат (n=67). В двух исследованиях использовалась круглая область, представленная круглой пунктирной линией.

Рисунок 3

Слева: Коробчатая диаграмма размера открытого поля с усами, отображающими доверительный интервал 5-95% и выбросы (n=69).Справа: диаграмма количества сегментов, использованных в открытом поле, с усиками, отображающими доверительный интервал 5–95%, и выбросами (n = 45).

Некоторые исследования дали информацию об адаптации размера ОВ к возрасту свиней в соответствии с предыдущими исследованиями [12, 81]. Чтобы выяснить, коррелирует ли размер OF с размером животных, мы изучили распределение веса и возраста и сравнили их с квадратными метрами OF. В целом, 6 исследований не предоставили информацию о возрасте/массе тела или размере ОФ и не могли быть включены в сравнение [34, 37, 63, 71, 75, 92].Несмотря на то, что в большинстве исследований сообщался возраст животных, раса и помеси различались, поэтому нельзя сделать оценку между возрастом, массой тела или размером животного. Поскольку данные о массе тела неоднородны (даны абсолютные [33, 54, 60, 62, 72, 93], диапазоны [31, 47–50, 78], средние и стандартные отклонения [12, 41, 51, 63, 80, 86, 88] или увеличение массы тела за счет приема пищи с течением времени [44, 59]), расчет невозможен. Таким образом, было проведено 60 исследований, в которые можно было бы включить информацию о возрасте животных.Для сравнения все возрасты были пересчитаны в дни.

Распределение по возрасту в исследованиях показало, что 63,8% (44 исследования) животных находились в возрасте от 2 до 79 дней, из которых в 13 исследованиях использовались поросята в период отъема <20 дней [11, 30, 40, 42 , 50, 55, 57, 65, 67, 71, 72, 90, 91]. Тридцать шесть процентов достигли возраста от 80 дней до 540 дней (Рисунок 4: Распределение животных по возрасту в исследовании. Возраст указан в днях с разбивкой по оси абсцисс на 100 дней). В. В шести исследованиях использовались взрослые свиньи в возрасте старше 6 месяцев.[31, 49, 51, 77, 78, 85]

Рисунок 4:

Распределение животных по возрасту в одном исследовании. Возраст указан в днях с разбивкой по оси x на 100 дней.

Корреляция возраста животных с размером ОФ не показала положительной корреляции (рис. 5).

Рисунок 5:

Корреляции (Pearson R) между возрастом и размером открытого поля обнаружено не было (n=58).

В большинстве из 24 исследований была предоставлена ​​информация о дне, когда тест проводился до полудня, и 54.5% между 10 и 11 утра (рис. 6). В четырех исследованиях упоминалось время начала ОП в 10:00, 14:30, 15:30 и 16:30 [24, 35, 51, 75]. В одном исследовании поведенческий тест был отложен до вечера (с 6 до 7 вечера) без дополнительных объяснений [69]. Сорок пять публикаций (65,2 %) вообще не относились к дневному времени суток.

Рисунок 6

Дневные промежутки времени, в которые выполнялась ОП. Серые линии относятся к общему времени, а черные линии относятся к времени начала с открытым концом.

Рисунок 6:

Duration Свиньи, проведенные в стартовом боксе, в открытом поле с дополнительным НЕ или HAT.

Более внимательное изучение распределения возраста по полу показало, что в исследованиях с использованием пометов обоих полов в основном использовались более молодые поросята со средним возрастом на 42,05 ± 34,1 дня, чем общий возраст животных (рис. 7).

Рисунок 7:

Распределение по возрасту в разбивке по полу.

Рисунок 7:

Радарная диаграмма, показывающая исследования, отнесенные к категориям научных вопросов. Каждая строка представляет одно число на шкале (n=69).

Для оценки среднего времени, которое свинья провела на манеже OF, мы различали тест OF, NOT и HAT.В 34 исследованиях (50,7%) проводили только тест OF, тогда как в других 35 исследованиях дополнительно использовали NOT и/или HAT (Рисунок Рисунок 6: Продолжительность пребывания свиней в стартовом боксе в открытом поле с дополнительным NOT или HAT). В шести исследованиях (8,7%) использовалась стартовая коробка с начальным временем ожидания и акклиматизации со средним значением 2,14 мин ± 1,87 [53, 62, 63, 68, 71, 77]. В большинстве исследований поведенческий тест ОФ длился 10 мин (8,92 мин ±12,2). Нарушитель (человек [41, 56, 62, 70, 71, 76, 92] или свинья [74]) был добавлен в восьми исследованиях.Это часто сочеталось с НЕ и разделялось по времени. Если использовался тест NOT, среднее время для этого теста было установлено равным 5 мин (5,74 мин ± 2,76).

Параметры, полученные Open Field

В этом обзоре мы разделили различные параметры на восемь основных категорий и подсчитали количество случаев в каждой публикации. Эти параметры встречались менее двух раз, когда отображались как «другие». Категории в таблице 1. Качество и ранжирование исследований на основе предоставленной информации, отсортированной по частоте возникновения.

Мы обнаружили, что подвижность и неподвижность, а также исследовательское поведение (если использовалось НЕ) являются категориями, в которых основной интерес следует за вокализацией и выделением/глотанием. В некоторых исследованиях наблюдается перекрытие параметров, определяемых как осанка, с неподвижными параметрами. Интересно, что параметры видоспецифического поведения свиней занимают лишь седьмое место и используются только в 20 исследованиях. Если видоспецифичное поведение (например, подталкивание или жевание) происходило как исследовательское взаимодействие с НЕ, оно классифицировалось как исследовательское поведение.Некоторые виды поведения были классифицированы авторами как исследование, а не как поведение. Мы обнаружили, что формулировка и интерпретация параметров несовместимы между различными исследованиями. Следовательно, неподвижные параметры, также описывающие позу, учитывались в обеих категориях.

Область научного вопроса

Во время этого систематического обзора в качестве вторичного результата возникает вопрос, к какой экспериментальной области относятся публикации, что дает более полное представление о том, как ОВ используется для свиней.Поэтому мы классифицировали все исследования по 6 основным категориям, а остальные объединили в другие категории.

Были определены следующие категории экспериментальных вопросов: тревога/стресс, токсикология (исследование наркотиков и их влияние на изменение поведения), изменение поведения в связи с диетой, генетический фон, вмешательство (например, хирургическое вмешательство), поведение, связанное с изменением окружающей среды, и другие ( Рисунок 9).

Риск систематической ошибки

Систематическая ошибка публикации была применена в соответствии с инструментом риска систематической ошибки SYRCLE [27] ко всем шестидесяти девяти исследованиям.Три независимых автора оценивали все исследования, в результате которых путем обсуждения было решено 250 вопросов. Было найдено полное согласие по RoB.

Предвзятость результатов в отношении случайного содержания приводит к выводу, что ни в одном исследовании не упоминалось случайное размещение животных в их домашних загонах. В основном животные были сгруппированы по помету из-за терпимости к компаньонам в отношении благополучия животных. Однако, если животные содержались в загонах с такими же контролируемыми климатическими условиями и размерами, автор решил ответить на вопрос положительно (низкий риск).В этом случае, по-видимому, нет отрицательного влияния распределения по разным загонам на результат эксперимента.

Поскольку в различных публикациях поведенческие тесты на животных часто упоминаются в особых условиях содержания, например, в теплых помещениях, с особыми характерными запахами или в зависимости от пола, опекуны или исследователи не могли быть ослеплены для эксперимента. В этом случае авторы выступили против исследования. Если животных назначали для всех вмешательств со случайным распределением или без него на отдельные тесты, вопрос о сокрытии распределения определялся как положительный.

Полный анализ суждений авторов в отношении RoB показан на рисунке 10. низкий риск систематической ошибки в отношении исходных характеристик.

Поскольку на поведенческое тестирование, а также на групповое содержание свиней большое влияние оказывает масса тела, однопометники или пол, большинство генераций последовательностей не были случайными, но учитывали этот важный аспект [84].Это привело к 30 исследованиям с высоким риском систематической ошибки при создании последовательности, согласно инструменту RoB.

Двадцать девять публикаций имели более высокий риск систематической ошибки, в основном из-за коммерческого финансирования, тогда как 39 исследований были одобрены властями или государственными учреждениями, что привело к низкому риску систематической ошибки. Кроме того, мы сосредоточились на дизайне исследования, чтобы ответить на вопрос о других источниках смещения.

В частности, ослепление оценщиков, а также рандомизация результатов, где элементы с наиболее неясным статусом.Только в 5 исследованиях использовалась слепая оценка по крайней мере для одного параметра.

Обзор оценочного риска всех исследований по доменам показан на рисунке 11.

Рисунок 11:

Обзор суждений авторов о каждом элементе риска систематической ошибки, представленном в процентах по всем включенным исследованиям.

Обсуждение

Целью этого систематического обзора было изучение устройства ОВ, используемого у свиней. Поэтому мы сначала изучили размер арен OF (рис. 2), чтобы определить, используется ли общий или стандартизированный размер.Хотя почти в половине исследований использовалась квадратная или почти квадратная форма OF, размер которой сильно различался между всеми исследованиями. В среднем размер ОВ составляет 11,3 м ² . Андерсен и др. все относились к размеру ОВ, адаптированному к возрасту животных [12]. Таким образом, во второй попытке мы сопоставили возраст животных (рис. 4: Распределение животных по возрасту в исследовании. Возраст указан в днях с разбивкой по оси x на 100 дней) с размером области OF (рис. 5). Однако нам не удалось найти никаких признаков положительной корреляции (R ² = 0.02) между этими параметрами/результатами. Мы предполагаем, что высокая дисперсия может быть связана со структурными условиями, а не с выбором в соответствии с возрастом или весом животных. В двух третях исследований ОВ был разделен на секции, нанесенные виртуально или нарисованные на полу. Сравнение включенных исследований показало высокую дисперсию количества разделов от нуля до 72 (рис. 3). В среднем количество секций составляло 12. В целом мы обнаружили, что размер и количество секций ОП непостоянны и не связаны с возрастом свиней.Для будущих экспериментов стандартизация поможет сравнить результаты между исследованиями и поместить их в общий контекст.

Часто сообщается, что в исследованиях пренебрегают самками млекопитающих. Хотя в клинических исследованиях больше внимания уделялось включению женщин, это не относится к фундаментальной науке и трансляционным исследованиям [94–96]. В отличие от этого, распределение по полу показало многочисленные исследования с использованием самок свиней или обоих полов, когда основное внимание уделялось пометам. По-видимому, существует небольшая предвзятость по признаку пола, которая увеличивает возможность переноса результатов на людей.

Мы также исследовали, есть ли дневное время, обычно используемое для тестов OF на свиньях. Грызуны ведут ночной образ жизни, и большинство тестов ОВ проводилось в их неактивной фазе [97]. Большинство домашних животных ведут дневной образ жизни [25]. Эти экологические характеристики могут затруднить перенос ОВ с грызунов на крупных животных. Сравнение между исследованиями показало, что утро между 9 и 10 часами вечера было наиболее часто используемым временем для выполнения теста ОП (рис.Серые линии относятся к общему времени, а черные линии относятся к времени начала с открытым концом.). В некоторых исследованиях упоминалось, что ОФ проводилось после кормления, а в некоторых кормление использовалось как часть теста ОФ [43, 88]. Известно, что предсказуемость пищевых вознаграждений или кормления является стрессором для крыс [98]. Если для теста на тревогу следует учитывать, что кормление и дневное время теста OF влияют на показатели результата. В некоторых исследованиях проводилось несколько различных тестов на животное в день (данные не показаны).Ни одно из этих семи исследований, проводивших тест OF позже 11 часов утра, не дало объяснения для выбранного времени. На данный момент не удалось найти никаких исследований влияния дневного времени на ОВ.

Еще одним важным результатом этого систематического обзора стали спецификаторы тестов. Здесь мы хотели определить, как долго животные оставались в ОП и есть ли какие-либо последовательности. Поскольку половина исследований использовала OF в сочетании с NOT или HAT, мы также хотели изобразить среднее время, затрачиваемое на эти тесты.Почти в половине исследований использовалось 5 минут, и только в трех исследованиях время было увеличено до одного часа (Рисунок 6: Продолжительность пребывания свиней в стартовом боксе в открытом поле с дополнительными НЕ или НАТ). Поэтому исходное 10-минутное время, разработанное Холлом [1] для грызунов, часто сокращалось до 5 минут. Тридцать четыре исследования добавили НЕ к тесту OF, увеличив время до 10 минут. Из этих исследований в большинстве изучались изменения в поведении, вызванные условиями окружающей среды, с учетом благополучия и развития животных (рис. 7) [24, 56].

В качестве еще одного потенциального источника изменчивости мы перечислили параметры, полученные с помощью ОВ (таблица 2). В отличие от исследовательского поведения, параметры мобильности, особенно расстояние и скорость, являются объективными величинами, которые можно легко определить с помощью программного обеспечения для отслеживания [99]. К сожалению, во многих исследованиях вместо этого использовался метод подсчета шагов, разделенных на секции, для определения подвижности животных. Из-за разного количества секций на площадь и разного размера сравнение исследований здесь затруднено.Кроме того, размер свиней в зависимости от их породы и возраста является еще одной переменной при определении пройденного расстояния. В отличие от объективных измеримых значений, такие параметры, как поведение и исследования, имеют потенциальные ограничения. Интерпретация этого видоспецифического поведения не имеет руководящих принципов. Хотя одни авторы интерпретируют избегание и неподвижность как неофобию [29], другие обнаружили, что это не отражает тревогу [100, 101]. Изменения в поведении свиней, связанные с поиском и обнюхиванием, уменьшаются с течением времени по мере снижения любопытства, а также на них влияет увеличение количества тестовых циклов [29, 42, 74].Кроме того, условия содержания также влияют на поведение свиней в открытом поле [69]. В целом во включенных исследованиях не было достигнуто консенсуса в отношении формулировок и категоризации параметров.

Таблица 2:

Параметры, полученные с помощью Open Field, отсортированы по категориям доменов и их вхождению.

Более пристальное внимание к классификации исследований по их научным вопросам показало, что изменения поведения, зависящие от окружающей среды, представляют наибольший интерес (рис. 7). За этим следуют в равных пропорциях токсикологические исследования и исследования тревоги.При разграничении сельскохозяйственных и лабораторных животных видно, что вопрос выращивания и обогащения среды в первую очередь актуален для сельскохозяйственных животных [23, 41, 69, 85]. Другие категории, такие как хирургические вмешательства или токсикология, применимы к лабораторным животным. Похоже, что тест OF может не только отвечать на научные вопросы, которые применимы к людям, но также является инструментом для оценки благополучия сельскохозяйственных животных [56, 79]. С 18 из 25 исследований в этой научной области, опубликованных после 2000 года, становится ясно, что растет осведомленность о благополучии сельскохозяйственных животных.

Ограничения

Качество включенных исследований различалось как с точки зрения доступных данных об установке, так и с точки зрения понятных результатов (Таблица 1 Качество и ранжирование исследований на основе предоставленной информации). Анализ RoB показывает, что, особенно в отношении систематической ошибки, связанной с эффективностью и обнаружением, процедуры были в основном неясными (рисунок). Мы не нашли доказательств того, что какое-либо исследование было контролируемым, что приводило к высокому риску систематической ошибки. Хотя генерация последовательности имеет высокий риск систематической ошибки в большинстве исследований, это не отражает тот факт, что свинья как целевое животное имеет сильное чувство иерархии.В некоторых исследованиях это поведение реализуется в вопросе исследования, где генерация последовательности не может быть случайной [40, 53, 60]. В других исследованиях для благополучия свиней представляет большой интерес группировка с равными по рангу сородичами или братьями и сестрами, чтобы уменьшить количество укусов или получить доступ к кормлению [30, 60].

Наше исследование имеет некоторые присущие ему ограничения из-за неоднородности данных. Для сравнения мы пересчитали возраст животных в дни, что, однако, приводит к небольшой разнице с реальным возрастом.Еще одним источником предвзятости является ограничение английского языка. Это, к сожалению, исключило некоторые исследования. Третьим фактором потенциальной систематической ошибки является оценка авторами предметных категорий параметров (таблица 2). Мы попытались сопоставить и отнести различные параметры результата к соответствующей категории. Во всех исследованиях отсутствовала информация о смещении результатов и обнаружения. Поскольку мы полагаемся на эти данные, мы не можем исключить связанный с этим высокий риск. Несмотря на эти ограничения, мы следовали строгому и конфиденциальному протоколу идентификации данных, чтобы уменьшить потенциальную погрешность.

Заключение

Существует острая потребность в стандартизации использования тестов в открытом поле у ​​свиней. Должны быть сделаны особенно общие условия по размеру, дневному времени и производительности. Кроме того, в центре внимания должен быть критический обзор параметров, полученных с помощью Open Field, а также терминологии. Можно констатировать, что использование только ОФ не дает ценной информации о моделях тревоги и сильно зависит от нескольких внешних факторов. Кроме того, по-видимому, количество тестов и возраст животных влияют на такие объективные параметры, как подвижность и элиминация.Следует критически изучить каждую экспериментальную установку, является ли «Открытое поле» значимым испытанием для свиней и применим ли перенос с моделей на грызунах.

Вклад авторов

MS и RT разработали это исследование. MS и LZ искали и собирали данные. М.С. написал рукопись. МК разработал графику. MS, MK и LZ судили RoB. Все авторы рассмотрели и отредактировали документ.

Раскрытие информации

Все авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.Это исследование финансировалось Немецким исследовательским фондом (Deutsche Forschungsgemeinschaft — DFG) от FOR-2591 до TO 542/5-2.

Немецкие исследователи будут разводить свиней для пересадки сердца человеку | Клонирование

Немецкие ученые планируют в этом году клонировать, а затем разводить генетически модифицированных свиней, которые будут служить донорами сердца для людей, на основе более простой версии сконструированного в США животного, использованного в прошлом месяце при первой в мире трансплантации от свиньи к человеку.

Экхард Вольф, ученый из Университета Людвига-Максимилиана (LMU) в Мюнхене, сказал, что его команда поставила перед собой цель подготовить к 2025 году новый вид, модифицированный на основе оклендской породы, готовый к испытаниям по трансплантации.

В ходе первой в своем роде операции команда Медицинского университета Мэриленда в прошлом месяце пересадила сердце свиньи с 10 модификациями неизлечимо больному человеку. Его врачи говорят, что он хорошо реагирует, хотя риск инфекции, отторжения органов или высокого кровяного давления остается.

«Наша концепция состоит в том, чтобы перейти к более простой модели, а именно к пяти генетическим модификациям», — сказал Вольф, чья работа вызвала бурные дебаты в стране с одним из самых низких показателей донорства органов в Европе и сильным движением за права животных.

Вольф, который в течение 20 лет занимается исследованием трансплантатов от животных к человеку, известных как ксенотрансплантаты, сказал, что его команда будет использовать все еще неэффективную технологию клонирования, чтобы создать только «животных-основателей», из которых будут выведены будущие генетически идентичные поколения. .

Первое такое поколение должно родиться в этом году, и их сердца будут проверены на бабуинах, прежде чем команда запросит разрешение на клинические испытания на людях через два или три года, сказал Вольф.

Трансплантация используется для людей с диагнозом органной недостаточности, у которых нет других вариантов лечения, список ожидания которых насчитывал около 8500 человек в Германии на конец 2021 года, согласно данным Национального фонда трансплантации органов страны.

Сторонники Вольфа говорят, что доноры животных могли бы помочь сократить этот список, но противники говорят, что технология грубо нарушает права животных, фактически низводя свиней до статуса фабрик по производству органов, в то время как обезьяны, используемые в экспериментах по трансплантации, умирают в агонии.

В феврале 2019 года петиция немецкой группы давления «Врачи против экспериментов на животных» с требованием запретить исследования в области ксенотрансплантации собрала более 57 000 подписей.
Кристина Берхтольд, представитель мюнхенского отделения Немецкой ассоциации защиты животных, назвала эту практику «очень сомнительной с этической точки зрения».

«Животные не должны служить запасными частями для людей», — сказала она. «… Домашнее животное, так называемое сельскохозяйственное животное, клон или естественное животное имеют одинаковые потребности, страхи и права».

Анализ работы и три поросенка

Жили-были три поросенка, которых мать отправила в мир на произвол судьбы. Первый поросенок был очень ленив. Он совсем не хотел работать и построил себе дом из соломы. Второй поросенок работал немного усерднее, но тоже был немного ленив, и построил свой дом из веток.Затем они двое пели, танцевали и играли до конца дня. Третий поросенок весь день усердно работал и построил свой дом из кирпичей. Это был крепкий дом с прекрасным камином и дымоходом. Казалось, что он может выдержать самые сильные ветры.

На следующий день по переулку, где жили три поросенка, прошел волк; и он увидел соломенный дом, и он почувствовал запах свиньи внутри. Он подумал, что из свиньи получится очень вкусная еда, и у него потекли слюнки.

Итак, он постучал в дверь и сказал: Поросенок, Поросенок впустил меня. Поросенок ответил: «Ни за волосы на моем подбородке, подбородок». Тогда волк сказал: «Я буду пыхтеть и пыхтеть и снесу твой дом». И действительно, он взорвал хлипкий соломенный домик.

Та же песня, второй куплет с домиком из палочек. Только когда он подошел к кирпичному дому, его пыхтение и пыхтение были напрасными. (Адаптировано с https://americanliterature.com/childrens-stories/the-three-little-pigs)

Итак, какое отношение все это имеет к анализу вакансий? Все!

Если у вас нет анализа работы или анализ работы плохо выполнен (также известный как дом из соломы или палок), вся ваша программа предотвращения травм может быть оспорена по закону.С кирпичным домом (анализ качества работы) у вас есть необходимое обоснование и защита.

Как возникают юридические проблемы?

Тестирование физических способностей перед приемом на работу : В рекомендациях EEOC и ADA указано, что тестирование перед приемом на работу должно быть связано с конкретной работой. Насколько конкретно ? Ознакомьтесь с этими судебными делами, в которых EEOC сочла, что тест неадекватно представляет работу:

• Каждая часть теста должна напрямую соотноситься с критическими аспектами требований к работе Zamlen v.Город Кливленд (6 ^th 1990)
• Произвольное установление сроков для завершения теста не соответствует стандарту деловой необходимости Пьетрас против Совета пожарных комиссаров (2 ^nd 1999)
• Критерии прохождения действительно должны быть минимальными требованиями к эффективности, а не просто чем больше, тем лучше Lanning v.
• Тест не может быть сложнее, чем работа, действующее тестирование помогает подтвердить, необходимо последовательно применять результаты тестирования EEOC v.Наберите Corp (8 ^th 2006) и мы говорим о высоте подъема и количестве повторений.
• Использовали предварительную оценку перед приемом на работу для проверки и отклонения кандидатов, которые, по их мнению, не могли работать водителями грузовиков. Требования к тестированию не могут быть соотнесены с требованиями к работе EEOC против Hirschbach Motor Lines 2018
• Испытание требовало большей прочности, чем было необходимо для работы EEOC против Central Refrigeration Services -2015)
Как анализ работы поддерживает другие аспекты предотвращения травм?

 Объективный тщательный анализ работы влияет и на другие аспекты предотвращения травм:

Возврат к работе .Как вы решаете, готов ли травмированный сотрудник вернуться к работе, если у вас нет подробного описания требований к работе, которое может быть рассмотрено врачом сотрудника или которое может стать основой для теста на возвращение к работе для конкретной работы? ?

Переходная пошлина . Как разработать безопасное и эффективное переходное дежурство, если нет подробного описания физических требований к работе? Может ли пострадавший сотрудник вернуться на свою предыдущую работу или ему нужно провести время на менее напряженной работе, пока он не сможет вернуться к полной занятости?

Программы кондиционирования/моделирования работы .Как лечащие врачи разрабатывают программы подготовки и имитации работы для конкретной работы, если нет подробного описания физических требований к работе? Какие упражнения будут наиболее эффективными? Какие имитации работы они должны делать?

Программы раннего вмешательства, соответствующие требованиям OSHA . Одним из наиболее важных компонентов программы раннего вмешательства является консультирование сотрудников по передовым методам работы, чтобы свести к минимуму нагрузку на организм. Если вы не знаете, чего требует работа, как вы можете дать надлежащий совет?

Эргономичная модификация .Чтобы знать, какие рабочие задачи следует изменить за счет эргономических улучшений, вы должны знать требования к работе. Трудно изменить то, что не определено количественно. Еще труднее измерить улучшение без адекватной количественной оценки.

Что представляет собой качественный анализ работы?

Объективные показатели и субъективный отчет . Многие аналитики работы используют самоотчеты сотрудников, выполняющих эту работу. Исследования показали, что надежность и валидность самоотчетов в отношении сведений о поднятом весе, частоте или продолжительности трудовой деятельности ограничены (1–3).

Измерение силы толкания/тяги с помощью датчика силы . Неопытные аналитики труда могут увидеть сотрудника, который толкает 200 фунтов. на роликовой тележке и задокументируйте требования к толканию работы как 200 фунтов. На самом деле, сила, необходимая для толкания 200 фунтов. гораздо меньше, потому что колеса тележки уменьшают трение и силу, которая требуется для преодоления сопротивления 200 фунтов. на тележке. И наоборот, 50-фунтовая коробка продукта на полке из грубой фанеры может потребовать значительно больше, чем 50 фунтов.силы, чтобы сдвинуть товар на полке из-за трения между полкой и коробкой. Эти примеры служат иллюстрацией того, что точные требования к усилию работы должны быть измерены с помощью датчика усилия.

Завышение продолжительности физических потребностей работы. Это ошибка, которую ErgoScience часто замечает среди аналитиков-любителей. «Частое» по определению Министерства труда США — это деятельность, которая происходит от 1/3 до 2/3 рабочего дня.Например, приседания и стояние на коленях могут происходить с перерывами в течение дня, но общее время, проведенное в этих положениях, редко превышает 1/3 дня. Тем не менее, мы часто видим отчеты об анализе работы, в которых приседания или стояние на коленях оцениваются как «Часто?»

Почему это важно? Когда врач отправляет работника обратно на работу с ограничением «Иногда» сидеть на корточках, а работа требует Часто сидеть на корточках… Угадайте, что? Сотруднику либо не разрешают вернуться на работу, либо ему дают легкую работу.Или кандидат на работу, который проходит тест на физические способности перед приемом на работу, не может пройти тест на частом уровне и проваливает тест, когда он действительно способен выполнять работу. Если любой из этих сценариев превратится в судебный иск, угадайте, кто окажется в выигрыше?

Используйте анализ работы, чтобы построить кирпичный дом!

Независимо от того, какие стратегии предотвращения травм вы реализуете, качественный и тщательный анализ работы, выполненный экспертами, имеет решающее значение для успеха и защищенности ваших программ.Если у вас нет терпения и ресурсов для создания качественного центра анализа вакансий, вы можете ожидать, что остальные ваши программы будут пыхтеть, пыхтеть и сдуваться. Сделай кирпичный дом! Выбирайте правильных, трудолюбивых специалистов!

Для получения дополнительной информации ознакомьтесь с нашим ресурсом по предотвращению травм: 

Для обсуждения анализа работы с экспертом:

1. https://americanliterature.com/childrens-stories/the-three-little-pigs
2. https://www.researchgate.сеть/публикация/243462056_Objective_and_self-report_work_performance_measures_A_comparative_analysis
3. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4992189/
4. https://www.jstor.org/stable/40966137

свиней в гамаках показывают ценность теста мозга

Если вы когда-либо были у офтальмолога, то, скорее всего, вы почувствовали внезапный поток воздуха в глаз, который представляет собой традиционный тест на глаукому. Это никому не нравится, но затяжка неинвазивна и безвредна.

Ученые используют аналогичный метод для проверки обучения и памяти у животных и людей. Подобно классическим экспериментам Павлова, связывающим нейтральный стимул с физиологической реакцией, тест на моргание сочетает свет или звук с быстрым дуновением воздуха в глаз. При повторении животное учится закрывать глаза или моргать только в ответ на свет или звук. Это называется ассоциативным обучением, и реакцией управляет область мозга, известная как мозжечок.

Хотя тест на моргание существует с 1922 года, до сих пор его никогда не пробовали проводить на свиньях.В новом исследовании Frontiers in Behavioral Neuroscience исследователи доказывают, что тест на моргание работает на 3-недельных свиньях, модельных видах для исследований в области нутритивной нейробиологии у младенцев.

«Идея состоит в том, что если мы сможем улучшить структурное развитие мозга с помощью пищевых вмешательств, то свиньи должны будут меньше экспериментировать, чтобы изучить правило. Сейчас мы находимся в процессе оценки продукта питания, но мы должны были получить сначала проверьте, чтобы он работал», — говорит Райан Дилгер, профессор кафедры зоотехники Университета Иллинойса и соавтор исследования.

Дилгер специализируется на влиянии питания на развивающийся мозг, при этом большая часть его работы направлена ​​непосредственно на производство детских смесей. Он использует новорожденных свиней, потому что, в отличие от грызунов, их анатомия и структура мозга, физиология кишечника и потребности в питании поразительно похожи на человеческих младенцев.

Команда Дилгера обычно изучает реакцию мозга свиней на новые ингредиенты с помощью магнитно-резонансной томографии, МРТ, которая фокусируется на структуре и размере различных областей мозга.Они также полагаются на хорошо проверенные поведенческие задачи, такие как распознавание новых объектов, которые отражают активность в гиппокампе и стриатуме, некоторых областях мозга, связанных с обучением и памятью.

Но Дилгеру нужен был инструмент для специфической оценки когнитивных процессов в мозжечке. Именно тогда он обратился к Хенк-Яну Боэле и Себастьяну Коеккуку, специалистам по глазному морганию и неврологам из Медицинского центра Эразма в Нидерландах.

Хотя люди и все виды животных подвергались тесту моргания, поведенческая парадигма никогда не подтверждалась для свиней.

«Для кондиционирования моргания человека и мыши мы используем совершенно разные системы», — говорит Боэле, исследователь с докторской степенью, работающий одновременно в Эразмусском и Принстонском университетах. «Люди легко поддаются инструктажу, обычно они очень сотрудничают и сидят неподвижно во время эксперимента, что позволяет легко делать затяжку и измерять веко. Мыши в основном фиксируют голову во время эксперимента, что облегчает подачу воздуха. пыхтите и измерьте веко Свиньи, напротив, были проблемой, потому что мы не хотели фиксировать их голову.Было действительно трудно надежно доставить воздушную затяжку и измерить реакцию век.

«Мы испробовали видеокамеры, диоды и многое другое, чтобы зафиксировать моргание. И нам пришлось использовать часть оборудования для доставки потока воздуха, который был очень близко к глазу, чтобы избежать каких-либо задержек. Нам действительно нужно острые, короткие затяжки, которые не являются инвазивными для животного, но все же очень точно рассчитаны по времени. Так что это было проблемой», — говорит он.

Решение заключалось в том, чтобы приклеить короткий кусок воздушной трубки рядом с одним глазом и приклеить магнитные датчики на лоб и веко для записи моргания.Система измеряла моргание с точностью до миллисекунды.

И да, Буль дунул себе в глаза, чтобы проверить систему. Это сработало. «О да, я моргнул», — смеется он.

Чтобы свиньи могли свободно двигать головой, но не вставали и не бегали, исследователи поместили их в изготовленный на заказ звукопоглощающий бокс с гамаком размером со свинью.

Очевидно, это было очень удобно.

Сангьюн Джунг, докторант программы неврологии в Иллинойсе и соавтор исследования, говорит: «Каждая свинья прошла пять дней обучения, чтобы приучить их к гамаку и тестовой среде.К третьему дню они были очень расслаблены, до такой степени, что некоторые из них буквально засыпали. Это было для нас небольшой проблемой во время анализа, потому что это определенно повлияло на их ответы. Но это также сказало нам, что вся эта парадигма поведения не вызывает у них стресса. Для нас это было интересно и неприятно одновременно.»

Как только свиньи привыкли к установке, началась настоящая работа. Свиньи провели серию из восьми тестов подряд. Первым был только воздушный поток, измерить рефлекс моргания.В следующих шести тестах небольшой синий светодиод сочетался с воздушным потоком. Свет загорелся на полсекунды, 500 миллисекунд, и в самом конце, когда свет все еще горел, была доставлена ​​струя воздуха. Эта последняя часть, с включенным светом и нагнетанием воздуха, длилась крошечные 50 миллисекунд. Последним тестом был только свет — без затяжек.

Исследователи повторили каждый набор из восьми тестов пять раз в каждый из пяти последовательных дней. Время между тестами немного варьировалось, чтобы свиньи не угадывали.

«Он не просто включался и выключался один раз в секунду. Система ждет, пока глаз не стабилизируется, а затем повторяет тест в произвольное время, чтобы свиньи не могли предвидеть затяжку», — говорит Дилгер.

Но в ходе пятидневного эксперимента они научились предвидеть затяжку. Довольно скоро свиньи закрывали глаза точно на 500-миллисекундной отметке во время восьмого испытания — того, что было с легким, но без затяжки.

«Время выбрано идеально. Если вы посмотрите на условные реакции век, вы увидите, что веко закрывается точно в тот момент, когда должна была быть сделана затяжка», — говорит Боэле.«Просто идеальная синхронизация мотора, вплоть до миллисекунды. Это прекрасно».

Исследовательская группа узнала о свиньях еще кое-что, чего раньше не знала.

«Мы узнали, что свиньи могут просто закрывать по одному глазу и подмигивать. На самом деле мы не были в этом уверены», — говорит Дилгер. «Но поскольку они свиньи, они будут расстраивать вас весь день. Некоторые свиньи просто лежали с закрытым глазом, а это означало, что мы не могли использовать этот конкретный предмет. Они умные существа.»

Тест на моргание специально направлен на активность мозжечка, той части мозга, которая отвечает за быстрые бессознательные прогнозы. Эти прогнозы связаны с двигательными реакциями, например, куда ступить во время ходьбы, и когнитивными процессами, такими как предсказание того, что кто-то собирается сказать дальше в разговоре.

«Мозжечок постоянно делает краткосрочные прогнозы. Важно взаимодействовать с окружающей средой. Когда мы думаем об обучении и памяти, мы часто думаем о действительно сложных когнитивных вещах, но большая часть нашего повседневного поведения — это просто плавное, автоматическое взаимодействие с окружающей средой», — говорит Боэле.«В режиме моргания ваш мозжечок в основном решает проблему за вас. Вам не нужно об этом думать. Он делает краткосрочные прогнозы, и это то, что мы изучаем».

Свиньи рождаются с более развитым мозжечком, чем человеческие дети. Это ясно из тестов на кондиционирование моргания, которые Боэль провел с младенцами в возрасте от шести до восьми месяцев; они обычно не изучают задачу в этом возрасте.

В отличие от людей, свиньи должны сразу же делать прогнозы двигательных и когнитивных функций, поскольку они могут вставать и ходить через несколько минут после рождения.Когда Дилгер изучает мозжечок свиньи с помощью МРТ, которая в основном фокусируется на структуре, он обычно не видит особых изменений из-за вмешательства в питание. Это потому, что мозжечок более развит у свиней при рождении, что делает их скороспелыми видами. Но изменения в питании могут изменить функционирование области мозга. Это то, что тест моргания скажет ему в будущих исследованиях.

«Часто функция следует за структурой, но не всегда. Дефицит питания может свидетельствовать о дефиците условных рефлексов моргания, этой ассоциативной учебной задачи», — говорит он.«Мы хотим иметь возможность использовать диетическое вмешательство как относительно неинвазивный способ понять развитие мозжечка здесь».

Ссылка: Boele HJ, Joung S, Fil JE, et al. Молодые домашние свиньи (Sus scrofa) могут выполнять кондиционирование по павловскому методу моргания. Передний Поведение Нейроски . 2021;15. doi: 10.3389/fnbeh.2021.6

Данная статья переиздана из следующих материалов. Примечание: материал мог быть отредактирован по длине и содержанию.За дополнительной информацией обращайтесь к указанному источнику.


.