Puzzle 9 | Загружаемые программы Nintendo Switch | Игры
Важная информация
Данный контент продается компанией Nintendo of Europe GmbH. Оплата будет произведена средствами Nintendo eShop, используемыми с учетной записью Nintendo, которая использовалась для совершения покупки.
Данный контент продается компанией Nintendo of Europe GmbH. Оплата производится средствами Nintendo eShop, используемыми с учетной записью Nintendo. При покупке данного контента действует Соглашение об учетной записи Nintendo.
Данный контент могут приобрести пользователи, которые зарегистрировали учетную запись Nintendo, а также приняли соответствующие юридические соглашения. Для покупки контента для Wii U или систем линейки Nintendo 3DS также требуется код Nintendo Network. Кроме того, ваши средства, используемые с учетной записью Nintendo, должны быть объединены со средствами, привязанными к коду Nintendo Network. Если средства еще не объединены, вы сможете сделать это во время процесса покупки. Перед началом покупки необходимо войти на веб-сайт с помощью учетной записи Nintendo и кода Nintendo Network. После этого можно просматривать информацию об играх и совершать покупки.
Для покупки контента для Wii U или систем линейки Nintendo 3DS ваши средства, используемые с учетной записью Nintendo, должны быть объединены со средствами, привязанными к коду Nintendo Network. Если средства еще не объединены, вы сможете сделать это во время процесса покупки. Вы сможете просмотреть подробности и завершить покупку на следующем экране.
Данное предложение действует для пользователей, которые вошли на веб-сайт с помощью учетной записи Nintendo, настройки страны которой совпадают с настройками страны этого веб-сайта. Если настройки страны вашей учетной записи Nintendo отличаются, данное предложение может быть изменено (например, цена будет отображаться в соответствующей местной валюте).
После обработки платежа контент будет загружен на консоль, связанную с вашей учетной записью Nintendo или с вашим кодом Nintendo Network в случае с Wii U или системами линейки Nintendo 3DS. На системе должно быть установлено последнее системное обновление и активирована функция автоматической загрузки. Система должна быть подключена к Интернету, и на ней должно быть достаточно свободного места. В зависимости от модели вашей игровой системы или консоли и степени ее использования может потребоваться дополнительное запоминающее устройство, чтобы загрузить программу из Nintendo eShop. Подробную информацию см. в разделе «Поддержка».
Для игр, в которых используется облачная потоковая технология, можно загрузить лишь бесплатное приложение для запуска.
Пожалуйста, убедитесь, что на вашей системе достаточно свободного места, чтобы завершить загрузку.
После обработки платежа контент будет загружен на консоль, связанную с вашей учетной записью Nintendo или с вашим кодом Nintendo Network в случае с Wii U или системами линейки Nintendo 3DS. На системе должно быть установлено последнее системное обновление и активирована функция автоматической загрузки. Система должна быть подключена к Интернету, и на ней должно быть достаточно свободного места. В зависимости от модели вашей игровой системы или консоли и степени ее использования может потребоваться дополнительное запоминающее устройство, чтобы загрузить программу из Nintendo eShop. Подробную информацию см. в разделе
Для игр, в которых используется облачная потоковая технология, можно загрузить лишь бесплатное приложение для запуска.
Пожалуйста, убедитесь, что на вашей системе достаточно свободного места, чтобы завершить загрузку.
Конкретная цена отображается в зависимости от страны, указанной в настройках вашей учетной записи Nintendo.
При покупке данного контента действует Соглашение об учетной записи Nintendo.
О предзаказах
Использование неразрешенных устройств или программ, позволяющих выполнить техническую модификацию консоли Nintendo или программы, может привести к невозможности играть в эту игру.
Данный товар содержит в себе средства технической защиты.
В контент невозможно играть до даты выпуска: {{releaseDate}} . Средства за предзаказ будут автоматически списаны не ранее чем за 7 дней до выхода игры. Если вы оформите предзаказ менее чем за 7 дней до выхода игры, то средства будут списаны сразу после покупки.
ТОП-34 — игры, похожие на Asphalt 9: Legends (Asphalt 9: Легенды)
Похожие игры для платформы
Какие игры похожи на Asphalt 9: Legends?
Отмечайте, какие игры больше похожи на Asphalt 9: Legends, а какие меньше, чтобы изменять их порядок вывода в списке
Если вы знаете игру по типу Asphalt 9: Legends, но ее нет в этом списке, пожалуйста, отправьте заявку на ее добавление. Тем самым вы поможете другим с выбором игры
октябрь 2006
Гонки / вождение, Вид от третьего лица
19 января 2021
Аркада, Гонки / вождение, Изометрия
1 сентября 2021
Гонки / вождение, Вид от третьего лица
7 мая 2021
Гонки / вождение, Вид от третьего лица
24 июля 2021
Гонки / вождение, Симулятор, Вид от третьего лица, Вид от первого лица, Онлайн
7 ноября 2016
Вид от третьего лица, Гонки / вождение, Вид от первого лица28 февраля 2013
Аркада, Гонки / вождение, Онлайн
19 марта 2015
Аркада, Гонки / вождение
16 июня 2021
Гонки / вождение, Вид от третьего лица, Симулятор
13 октября 2020
Аркада, Гонки / вождение, Экшен, Вид от третьего лица
27 ноября 2019
Гонки / вождение, Вид от третьего лица, Вид от первого лица
Вид от третьего лица, Гонки / вождение
2 мая 2021
Гонки / вождение, Вид от третьего лица, Вид от первого лица, Вид сбоку, Симулятор, Онлайн
25 сентября 2020
Гонки / вождение, Вид от третьего лица, Симулятор
2 апреля 2021
Гонки / вождение, Экшен, Вид от третьего лица
1 апреля 2021
Симулятор, Гонки / вождение, Вид от третьего лица, Вид от первого лица
3 марта 2021Вид от третьего лица, Вид от первого лица, Гонки / вождение, Аркада
6 июля 2008
Гонки / вождение, Вид от третьего лица
28 октября 2019
Аркада, Гонки / вождение, Вид от третьего лица
3 ноября 2009
Гонки / вождение, Вид от третьего лица
8 августа 2013
Аркада, Онлайн, Симулятор, Гонки / вождение, Вид от третьего лица
15 мая 2018
Аркада, Гонки / вождение, Вид от третьего лица
Аркада, Гонки / вождение, Вид от первого лица, Вид от третьего лица
9 июня 2019
Гонки / вождение, Вид от третьего лица, Аркада
14 июня 2013
Экшен, Хоррор, Стелс, Вид от третьего лица, Квест / Приключение, Постапокалиптика
16 сентября 2015
Аркада, Гонки / вождение, Условно-бесплатная, Онлайн, Вид от третьего лица
11 февраля 2016
Вид от третьего лица, Гонки / вождение, Онлайн
25 октября 2020Вид от третьего лица, Аркада, Гонки / вождение
21 октября 2020
Вид от третьего лица, Гонки / вождение, Экшен
31 июля 2020
Гонки / вождение, Экшен, Вид от третьего лица, Аркада
22 мая 2019
Аркада, Гонки / вождение, Вид от третьего лица
9 февраля 2021
Вид от третьего лица, Симулятор, Гонки / вождение
20 июня 2012
31 августа 2020
Вид от третьего лица, Гонки / вождение, Онлайн
9 Monkeys of Shaolin — дата выхода, системные требования и обзор игры 9 Monkeys of Shaolin, гайды, официальный сайт, видео и скриншоты
9 Monkeys of Shaolin — это игра в жанре rpg, приключения и экшен, разрабатываемая Sobaka Studio для платформы PC. Окружение в игре относится к cтилистике фэнтези, а выделить особенности можно следующие: инди, экшен, приключенческая игра, файтинг, beatem up, кооператив, для одного игрока, боевые искусства, ретро, вид сбоку, приключенческий экшен, контроллер, яркий главный герой, изменяемый внешний вид персонажа, совместная локальная игра, совместная игра по сети, атмосфера, достижения steam, приключение, кастомизация персонажа, ролевая игра, для нескольких игроков, мультипликация, ролевой экшен, 90-е, стилизация, слэшер, 3d, ниндзя, от третьего лица, цветастая, глубокий сюжет, коллекционные карточки, сетевой кооператив, локальный кооператив. Вам будут доступны такие игровые режимы как «совместная игра», «для нескольких игроков» и «для одного игрока».
Во всем мире игра 9 Monkeys of Shaolin распространяется по модели разовая покупка издателем Buka Entertainment. На данный момент стадия игры — запущена, а дата её выхода — 16.10.2020. Бесплатно скачать 9 Monkeys of Shaolin, в том числе и через торрент, нельзя, поскольку игра распространяется по модели разовая покупка. Игра поддерживает русский язык.
MMO13 дает 9 Monkeys of Shaolin оценку 7.9 из 10. Сайт metacritic оценивает эту игру на 7.1 из 10. Игра распространяется в магазине Steam, пользователи которого оценивают эту игру своими отзывами на 8.8 баллов из 10.
Официальное описание игры гласит:
«Настоящее возрождение культового жанра beat ’em up в духе классических игр старой школы! В роли простого китайского рыбака Вэй Чена вам предстоит отомстить за нападение пиратов на родную деревню и вероломное убийство родных и близких.»
Ваш браузер не поддерживает это видео.
Игры недели #9 (6.09.21 — 12.09.21)
На момент написание данной статьи — воскресенье, а значит пришло время посмотреть, во что можно будет поиграть на следующей неделе. В данном выпуске мы собрали для вас информацию обо всех релизах, тестированиях, обновлениях и других событиях, связанных с онлайн-играми, которые произойдут в период с 6 по 12 сентября 2021 года. Напоминаем, что статья может со временем дополняться.
6 сентября
- Начнется открытое стресс-тестирование хардхорной MMORPG с элементами песочницы Mortal Online 2. Продлится данный этап до 12 сентября, а принять участие смогут все пользователи, которые запросят доступ на странице в Steam. Разработчики собираются проверить серверы, а также собрать фидбек от игроков.
7 сентября
- «Королевская битва» Bloodhunt, основанная на вселенной культовой RPG Vampire: The Masquerade, выйдет в стадии раннего доступа на ПК. К полноценному релизу разработчики собираются добавить статистику и улучшенную поддержку геймпада, а также исправить ошибки.
- На PC, PlayStation 4 и Xbox One состоится релиз симулятора водителя автобуса Bus Simulator 21. Игра предлагает 30 лицензированных автомобилей популярных марок, таких как Scania, Volvo и других. Также реализованы карты знаменитых городов мира, среди которых европейские и американские.
- Microsoft Flight Simulator (2020) получит крупное обновление под названием World Update VI. Оно добавит в игру новые страны для полетов, такие как Германия, Австрия и Швейцария, с картами высокого разрешения и трехмерными городами.
- В русской версии MMORPG Lineage 2 Essence появятся да новых сервера: Amber и Pearl. Они будут включать в себя общие межсерверными локации, ценные для получения опыта и лута. Также на серверах станут проходить специальные ивенты в честь запуска.
8 сентября
- Для многопользовательского шутера от первого лица Valorant выйдет обновление, запускающее второй акт третьего эпизода под названием «Отражение». Известно, что оно добавит в игру новую карту Fracture, в которой игрокам придется переосмыслить свои стратегии и действовать по новому.
- Для ПК-версии «Королевской битвы» PUBG: Battlegrounds выйдет обновление 13.2. В игру добавят очередной билет выжившего, пистолет-пулемет P90 и Казуальный режим на карте Эрангель. Кроме того, некоторые карты подвергнутся изменениям.
- Дополнение «Пробуждающееся пламя» для MMORPG The Elder Scrolls Online, ранее вышедшее на ПК, станет доступно на консолях PlayStation 4, PlayStation 5, Xbox One и Xbox Series X|S. Вместе с ним в игре появятся два новых подземелья: «Ужасный подвал» и «Оплот Алый Лепесток».
- Fallout 76 получит обновление, с которым у игроков появится возможность создавать кастомные миры с собственными настройками. В них можно использовать уже существующих персонажей, но после присоединения к такому миру у вас будет отдельный прогресс для него.
9 сентября
- В экшене от третьего лица For Honor стартует 3-й сезон 5-го года под названием Tempest. В нем произойдет множество геймплейных изменений, а также разработчики запустят несколько событий. В тот же день начнется очередной этап чемпионата Dominion Series.
- В Южной Корее выйдет мобильная MMORPG Mu Archangel 2. В новой части разработчики ввели возможность управления тремя героями одновременно и добавили больше контента, улучшили гильдии, боссов, подземелья, интерфейс и многое другое.
- Мобильная MOBA League of Legends: Wild Rift пополнится сразу двумя персонажами. В игру добавят чемпионов Брэнд и Нуну, ранее доступных в ПК-версии League of Legends. Вместе с этим будет запущено специальное событие «Лед и пламя» с различными наградами.
- Начнется открытое бета-тестирование MMORPG New World, которое продлится до 12 сентября. Принять участие смогут все желающие, в том числе и те, кто не оформлял предварительный заказ.
10 сентября
- На Nintendo Switch состоится релиз WarioWare: Get It Together! — игры про одного из злодеев вселенной «Марио». Проект будет включать в себя коллекцию различных кооперативных мини-игр, в которых можно развлечься вместе с друзьями.
- До 13 сентября будет проходить эксклюзивный этап закрытого бета-тестирования шутера от первого лица Call of Duty: Vanguard для владельцев PlayStation 4 и PlayStation 5. Бета-версия будет включать в себя шесть режимов и пять карт. Позже тестирование пройдет на всех платформах.
9. Темная сторона — Прохождение игры в картинках пошагово
9. Темная сторона. В статье описано Полное и подробное прохождение игры с картинками. Дан обзор всех секретов, советов, тактик и особенностей игровой механики от начала и до конца. Лучше сразу Cкачать официальную версию игры по этой ссылке. Так как «пиратские» версии очень часто содержат вирусы, не полный перевод или баги в игре.
Содержание статьи
- Общие советы
- Глава 1: Подземелье
- Глава 2: Большой зал
- Глава 3: Деревня
- Глава 4: Подземный
Общие советы
Сцены скрытых объектов и мини-игры часто рандомизированы — ваше решение может отличаться.
Скрытые объекты, перечисленные в желтом, являются скрытыми или требуют, чтобы вы изменили элемент на то, что вы пытаетесь найти.
Сцены со скрытыми объектами будут называться HOS в этом пошаговом руководстве.
Внутри журнала вы найдете подсказки и информацию, которую вы нашли (A).
Нажмите на вкладку Цели, чтобы просмотреть текущие задачи (B).
Амулет будет светиться, когда будут найдены скрытые руны; нажмите на амулет и переместите его через сцену, чтобы найти руны (С).
Ваш инвентарь находится на нижней панели — нажмите на предмет, чтобы выбрать его для использования (D).
Подсказки не ограничены, но вы должны подождать, пока счетчик подсказок не пополнится (F).
Глава 1: Подземелье
У вас будет возможность интерактивной помощи.
Возьмите КАМЕННУЮ ЗВЕЗДУ справа и поместите ее в нишу слева (A).
Нажмите на право, удалите листья и возьмите ПЛИТКУ (B).
Поместите ПЛИТКУ в решетку пола для мини-игры (С).
Поместите плитки в сетку, чтобы те же символы касались краев.
Эта мини-игра рандомизирована — ваше решение может отличаться.
Наше решение показано здесь (D).
Спуститесь по ступенькам, которые появляются.
Возьмите ЛОМ и используйте его, чтобы открыть отделение (E).
Осмотрите отделение и прочитайте свиток на верхней полке (F).
Переместите предметы на нижнюю полку и возьмите МЕХАНИЗМЫ (G).
Используйте МЕХАНИЗМЫ на подъемник для мини-игры (H).
Получите все вращающиеся механизмы, нажимая на них в определенном порядке.
Нажмите на шестерни в числовом порядке (1-8).
Идите направо.
Посмотрите в бочку и возьмите ВЕНТИЛЬ (I).
Возьмите 1-ую ЗВЕЗДУ (J)
Нажмите на скелет для поиска предметов (K).
Найдите все предметы в списке.
Используйте спички на лампе, чтобы сделать горящую лампу (L).
Вы получите ЗОЛОТУЮ ЗВЕЗДУ.
Идите направо, затем идите вниз.
Нажмите на постамент и поместите ЗОЛОТУЮ ЗВЕЗДУ в нишу (M).
Идите вперед к двойным дверям (N).
Возьмите БОЕВОЙ ТОПОР (O).
Используйте ЛОМ на урну (P).
Загляните внутрь разбитой урны; возьмите статуэтку льва и прочитайте свиток (Q).
Посмотрите на правого рыцаря и возьмите амулет (R).
Когда красный амулет в левом нижнем углу светится красным, это означает, что на сцене есть руны.
Нажмите на амулет, чтобы взять его из угла, затем переместите его, чтобы найти скрытые руны (S).
Нажмите, когда вы находитесь над руной, чтобы сделать ее видимой.
Нажмите на кирпич с символом «9» (T).
Поместите статуэтку льва в нишу (U).
Осмотрите отверстие (V), возьмите ЗОЛОТУЮ СТРЕЛУ и прочитайте свиток на зелье (W).
Посмотрите на замок на двери; используйте ЗОЛОТУЮ СТРЕЛУ на замок для мини-игры (X).
Поменяйте местами синие и фиолетовые стрелки.
Стрелки могут перемещаться только в том направлении, в котором они указывают на пустое место рядом с ними, или прыгать на другую стрелу в этом месте.
Нажмите на стрелки в пронумерованных позициях в следующем порядке: 3-5-6-4-2-1-3-5-7-6-4-2-3-5-4.
Выйдите из крупного плана и спуститесь дважды.
Используйте ТОПОР БОРЬБЫ, чтобы сломать деревянные двери (Y).
Пройдите в лабораторию (Z).
Возьмите КУЛОЧКУ (A).
Обратите внимание на механизм контроля воды (B).
Обратите внимание на стол (С).
Нажмите на полки для поиска предметов (D).
Найдите все предметы в списке.
Используйте ключ на замке, чтобы получить разблокированный замок (E).
Вы получите БУТЫЛКУ АЗУРУСА.
Посмотрите на механизм контроля воды для мини-игры.
Поместите трубы в сетку, основываясь на числах, чтобы была непрерывная труба (F).
Каждое число указывает, сколько труб находится на границе этого числа.
Поверните клапан, чтобы слить воду на нижнем уровне (G).
Посмотри на стол.
Поместите ВЕНТИЛЬ на смеситель (H).
Поместите БУТЫЛКУ АЗУРУСА в синее пятно (I).
Возьмите ДРЕВНИЙ СИМВОЛ (J).
Возьмите и прочитайте свиток с раскрывающимся зельем (K).
Выйдите из крупного плана и идите вниз.
Нажмите на альков и используйте ЛОМ, чтобы открыть решетку (L).
Возьмите 1-й ЖЕТОН (M).
Идите направо.
Нажмите на плитку и поместите ДРЕВЕСНЫЙ СИМВОЛ в углубление (N).
Возьмите БУТЫЛКУ ВИРИДИСА (O).
Используйте МОЛОТОК на задней стене (P).
Идите вперед через дыру в стене.
Посмотрите на сцену и вернитесь к лабораторному столу.
Обратитесь к своему дневнику за рецептом зелья (Q).
Поместите БУТЫЛКУ ВИРИДИСА на зеленое пятно (R).
Используйте зеленую бутылку на левой трубе 3 раза (S).
Используйте красную бутылку на центральной трубе один раз (T).
Используйте синюю бутылку на правой трубе дважды (U).
Нажмите на клапан, чтобы смешать зелье (V).
Возьмите маленькую бутылочку с полки и используйте ее на контейнер, чтобы получить ЗНАК ВЫЯВЛЕНИЯ (W).
Выйдите из крупного плана стола, спуститесь, затем идите направо.
Посмотрите на планшет и используйте ВЫЯВЛЯЮЩУЮ ЧАСТЬ на табличку (A).
Обратите внимание на символы, которые появляются.
Идите направо, затем идите вперед.
Посмотрите на сундук и введите символы с помощью клавиш со стрелками (B).
Осмотрите сундук и возьмите 2-ой ЖЕТОН (С).
Пройдите назад дважды.
Посмотрите на сундук (D).
Поместите ЖЕТОН с синими драгоценными камнями слева (E), в то время как ЖЕТОН с красными и зелеными драгоценными камнями направо (F).
Это вызовет мини-игру.
Эта мини-игра состоит из 2 частей.
Для первой части переместите драгоценные камни в центр, чтобы соответствовать образцу, показанному слева (G).
Нажмите в центре 7 кругов, чтобы повернуть их по часовой стрелке.
Нажмите на следующее: Lx2, Mx4, Jx4, Kx2, Hx2, Ix2 и Hx2.
Для второй части переместите драгоценные камни в центр, чтобы соответствовать образцу, показанному справа (N).
Нажмите в центре 7 кругов, чтобы повернуть их по часовой стрелке.
Нажмите на следующее: Sx3, Px2, Qx2, Px2, Rx1, Px1, Qx2, Px1, Rx4, Px5 и Ox2.
Загляните в сундук для поиска предметов.
Найдите все предметы в списке.
Нажмите на горшок, чтобы найти драгоценные камни (T).
Используйте кисть на красную краску (U), затем на цветок, чтобы сделать красный цветок (V).
Вы заработаете драгоценные камни.
Пройти вперед; посмотрите на замок на дверях и используйте драгоценные камни, чтобы вызвать мини-игру.
Сдвиньте драгоценные камни к точке на звезде с тем же цветом.
Нажмите на точки в следующем порядке: 8-3-7-2-6-1-5-9-4-8-3-7-2-6-1-5-9-4-8-3-7- 2-6-1-5-9-4-8-3-7-2-6-1-5-9-4.
Пройти вперед.
Глава 2: Большой зал
Посмотрите на рыцаря слева и возьмите ЩИТ (A).
Обратите внимание на запертую дверь слева (B).
Идите вперед в большой зал и посмотрите на стол (С).
Выйдите из крупного плана и спуститесь снова.
Выйдите в сад справа (D).
Нажмите на сломанную статую справа для поиска предметов.
Найдите все предметы в списке.
Поместите корону на лягушку, чтобы сделать принца лягушек (E).
Вы получите МЕЧ НОЖА.
Пройдите назад 4 раза, затем направо и вперед.
Дайте ЩИТ и рыцарский меч рыцарю (F).
Посмотрите на землю и возьмите СЛЕДУЮЩУЮ КРОВЬ (G).
Вернитесь в сад.
Посмотрите на статую слева и поместите СЛЕДУЮЩУЮ КОРОБКУ в подвеску (H).
Леди Анна передаст вам СЛЕДУЮЩИЙ КРАСНЫЙ МЕДАЛЬОН.
Посмотрите на основание теперь разбитой левой статуи и возьмите ДЕСЯТЬ ЖЕЛЕЗОВ (I).
Вернитесь в подземную зону и пройдите через дыру в стене.
Поместите ДЕВЯТЫЙ ЖЕЛЕЗ в пространство «9» на скале (J).
Осмотрите купе, прочитайте свиток и возьмите СТАЛЬНУЮ РАМКУ (K).
Вернитесь на верхний уровень, пройдите через двери и посмотрите на запертую дверь слева.
Поместите СТАЛЬНУЮ РАМКУ в замок для мини-игры.
Нажмите плитки так, чтобы все плитки вниз.
Нажатие на плитку повлияет на окружающие плитки.
В этой мини-игре 4 уровня.
Нажмите на плитки в числовом порядке.
Идите налево, затем идите вперед в библиотеку.
Нажмите на верхний левый книжный шкаф, откройте книгу и возьмите КЛЮЧ (P).
Нажмите на верхний правый книжный шкаф и возьмите КОЛЬЦО С ПЕЧАТКОЙ ХУДОЖНИКА (Q).
Нажмите на мусорную корзину и возьмите ЩЕТКУ (R).
Обратите внимание на лестницу, ведущую на верхний уровень (S).
Нажмите на стол для поиска предметов (T).
Найдите все предметы в списке.
Откройте ящик, чтобы найти драгоценность и часы (U).
Используйте спички на свече, чтобы сделать горящую свечу (V).
Возьмите пробку из бутылки, чтобы сделать сбалансированные весы (W).
Вы получите 1-ую КНИГУ.
Идти вверх по лестнице.
Нажмите на красный амулет в левом нижнем углу (X).
Найдите 6 рун.
Вернитесь к лабораторному столу.
Используйте КЛЮЧ, чтобы открыть металлическую коробку (A).
Возьмите ревитализирующий концентрат и кислоту (B).
Выходите из-за стола.
Осмотрите решетку на полу и используйте КИСЛОТУ на защелку (С).
Используйте ЛОМ, чтобы открыть решетку (D), затем возьмите РЫЧАГ (E).
Вернитесь на верхний уровень, пройдите через двери, затем войдите в дверь слева.
Нажмите на сундук и поместите ЩЕТКУ в стакан (F).
Используйте КОЛЬЦО С СИГНЕТОМ ХУДОЖНИКА на ящик (G).
Используйте РЫЧАГ в нижней части для мини-игры (H).
Переместите рычаг (I) в отверстие (J), сдвинув его вдоль направляющих.
Нажмите на одну из стрелок вокруг рычага, чтобы переместить его в этом направлении.
Рычаг будет двигаться, пока не остановится у стены.
Переместите рычаг в указанном пути.
Возьмите МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ПЛИТКУ из ящика.
Выход в сад.
Посмотрите на замок на воротах и используйте МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ПЛИТКУ, чтобы вызвать мини-игру.
Сдвиньте кирпичи, чтобы синий кирпич мог выйти справа.
Переместите кирпичи как можно дальше в указанном направлении, кроме шага 9 (1-8).
Переместите кирпич на шаге 9, только на 1 позицию вниз (9).
Сдвиньте кирпичи, чтобы синий кирпич мог выйти справа.
Шаги 10-17 показаны здесь.
Идите вперед через ворота.
Нажмите на решетку и возьмите нож (K).
Возьмите СТЕКЛЯННУЮ банку (L).
Пройдите назад дважды.
Нажмите на шрифт и вылейте Ревитализирующий концентрат в таз (M).
Используйте стеклянную банку на зеленую жидкость, чтобы получить ХИМИЧЕСКИЙ РОСТ (N).
Идите направо, затем идите вперед.
Нажмите на урну и используйте ХИМИКАТ РОСТА на растении (O).
Возьмите ЦВЕТОК (P).
Войдите в здание.
Нажмите на красный амулет в левом нижнем углу (Q).
Найдите 6 рун.
Посмотри на урну; используйте НОЖ, чтобы срезать виноградные лозы и возьмите 2-й ЗВЕЗДНЫЙ КАДР (R).
Возьмите ЛОПАТУ (S).
Обратите внимание на вход в дерево (T).
Нажмите на картину для поиска предметов (U).
Найдите все предметы в списке.
Осмотрите урну для перчатки (V).
Используйте карандаш на лошадь, чтобы сделать зебру (W).
Вы получите набор для рисования.
Выйдите из здания и идите налево.
Посмотрите на дерево и возьмите КОГОТЬ ИЗ ВЕРУЛЬФА (X).
Используйте ЛОПАТУ, чтобы вырыть землю (Y).
Нажмите на крупный план и используйте НОЖ, чтобы взять КОРЕНЬ МАНДРАГОРА (Z).
Пройдите назад 3 раза, затем налево.
Посмотрите на сундук и используйте набор для рисования на палитре; возьмите ПАЛИТРУ ХУДОЖНИКА (A).
Посмотрите на картину сэра Генри (B).
После кат-сцены используйте ПАЛИТРУ ХУДОЖНИКА на картине для мини-игры.
Раскрась герб правильными цветами.
Обратитесь к вашему дневнику за гербом (С).
Используйте кисть на цвет (D), затем нарисуйте на гербе (E).
Вы получите Герб.
Посмотрите за картиной и возьмите 2-ю КНИГУ.
Вернитесь в библиотеку.
Посмотрите на большой стол перед окном для мини-игры.
Поместите 2 ЗВЕЗДНЫХ КАДРА в пустые места, чтобы вызвать мини-игру.
Вы должны опустить все тарелки; толкание одной пластины повлияет на другие пластины.
Нажмите на панели в порядке (1-3).
Возьмите БИОЦВЕТНЫЙ КУБ (F).
Переезд к входу на дерево.
Используйте BI-COLOR CUBE на сетке для мини-игры.
Скатайте кубики так, чтобы серая сторона была обращена вверх.
Нажмите на куб, чтобы перекатить его на соседнее пустое место.
Нажмите на кубики в следующих местах: 8-7-4-5-6-3-2-1-4-5-2-3-6-5-2-1-4-5-2-3-6 -9-8-5-4-7-8-5-4-1-2-5-6-3-2-5.
Введите дерево.
Обратите внимание на схему на задней стенке (A).
Используйте НОЖ, чтобы взять ГРИБ (B).
Возьмите воронку (С).
Возьмите 3-ю КНИГУ (D).
Обратите внимание на стол (E).
Нажмите на книжный шкаф для поиска предметов (F).
Найдите все предметы в списке.
Используйте маску на енота, чтобы сделать зорро-енота (G).
Используйте нож на тыкву для куска тыквы (H).
Вы получите ЧАСТЬ ЧЕРНОГО.
Посмотри на стол.
Откройте книгу и возьмите РИСУНОЧНУЮ ТАБЛИЧКУ (I).
Поместите воронку в колбу (J).
Вернитесь в библиотеку и поднимитесь по лестнице.
Нажмите на светло-синий символ в центре книжного шкафа, чтобы увидеть скрытые книги.
Посмотрите на крупный план и поместите 3 КНИГИ на полку для мини-игры.
У каждой книги есть символ на позвоночнике, который составлен из числа и его отражения.
Нажмите на книги в числовом порядке (1-7).
Идите вперед в скрытую комнату.
Возьмите ШАБЛОН с ВОЛШЕБНЫМИ ЛИНИЯМИ (K).
Нажмите на шкатулку и используйте ТАБЛИЧКУ РИСУНКА для мини-игры (L).
Символы, показанные у основания таблички, — это порядок нажатия кнопок (M).
Нажмите кнопки в следующем порядке: OQSNPNRPQS.
Осмотрите коробку и возьмите ПОРОШОК ВЫЯВЛЕНИЯ (T).
Вернитесь в комнату внутри дерева.
Посмотрите на рисунок на стене и поместите УЗОР ВОЛШЕБНЫХ ЛИНИЙ (U).
Возьмите ВОЛШЕБНЫЙ УЗОР МАГИИ (V).
Посмотри на стол.
Используйте ПОЯВЛЯЮЩИЙСЯ ПОРОШОК на книгу (W).
Нажмите на книгу для мини-игры (X).
Найдите все экземпляры каждого символа.
Выберите все из одного символа, нажав на каждый экземпляр.
Повторяйте этот процесс, пока все символы не будут удалены из книги.
Прочитайте инструкции к рецепту, затем выйдите из книги крупным планом.
Поместите ЧЕСНОК на разделочную доску, используйте НОЖ, чтобы расколоть его (1).
Поместите нарезанный чеснок в чашку (2).
Разрежьте МАНДРАГОРСКИЙ КОРЕНЬ и поместите его в чашку (3).
Порежьте ГРИБ и поместите его в чашку (4).
Поместите коготь WEREWOLF (5) и ЦВЕТОК в чашку (6).
Используйте ступку, чтобы перемолоть все в чашке (7).
Вылейте чашку в миску (8).
Вылейте миску в колбу (9).
Используйте свечу, чтобы зажечь под колбой (10).
Возьмите АНТИВЕРВОЛЬНОЕ Зелье (11).
Вернитесь на верхний уровень библиотеки и войдите в скрытую комнату.
Используйте ВОЛШЕБНЫЙ УЗЕЛ Звезды на демона (A).
Нажмите на звезду на демоне для мини-игры (B).
Начиная с любой точки звезды, нарисуйте непрерывную линию, пересекающую каждую точку один раз.
Наше решение начинается с верхней части рисунка, затем следуйте стрелкам вокруг (С).
Продолжайте из пункта (D).
Продолжая нашу звездную мини-игру, следуйте за стрелками из точки (E).
Последние шаги в решении начинаются в точке (F).
Нажмите на красный амулет в левом нижнем углу (G).
Найдите 3 руны.
Вы должны попробовать амулет снова.
Нажмите на красный амулет в левом нижнем углу (H).
Найдите 3 руны.
Обратите внимание на дыру в полу.
Поднимитесь по лестнице, войдите в секретную комнату и возьмите ЗАКРЫТУЮ КНИГУ СЕКРЕТОВ, которая была позади демона.
Вернитесь на сцену с оборотнем.
Используйте зелье против оборотня на оборотня (I).
Алистан передаст вам медальон.
Обратите внимание на могилу справа (J).
Идите вперед (K).
Глава 3: Деревня
Возьмите 1-ую СТАТУЭТКУ (A).
Нажмите на сарай кузнеца и используйте ЛОМ, чтобы удалить цепи (B).
Войдите в сарай кузнеца.
Возьмите ЩИПЦЫ (С).
Используйте ЛОМ, чтобы поймать ловушку (D).
Выйдите из сарая, пройдите в деревню, затем войдите в арку слева.
Поговорите с призраком Бьянкой (E).
Возьмите ВЕРЕВКУ (F).
Идите вниз, затем идите вперед между зданиями.
Возьмите КОЛЬЦО ВИНЕГЛА (H).
Вернитесь в библиотеку и посмотрите на дыру в полу.
Используйте ВЕРЕВКУ на отверстие (I).
Возьмите 2-ую СТАТУЭТКУ (J).
Спуститесь по веревке.
Возьмите обезображенную лилию (K).
Посмотрите на верхнюю часть саркофага и поместите ПАЛЬТО ОРУЖЕЙ в нишу (L).
Используйте ЛОМ на диске, который появляется (M).
Возьмите ДИСК, который падает на пол (N).
Вернитесь к кузнецу.
Посмотрите на дверь и используйте ДИСК на замок (O).
Войдите в здание, поговорите с кузнецом, и он даст вам пустой кувшин для вина.
Идите вперед в деревню.
Нажмите на окно таверны и используйте ЛОМ, чтобы разбить стекло (P).
Войдите в таверну.
Посмотрите в бочку и возьмите ДАТЧИК ДАВЛЕНИЯ (Q).
Возьмите ПУСТУЮ банку (R).
Возьмите СТЕКЛЯННУЮ ТРУБУ (S).
Обратите внимание на запертый шкаф (T).
Нажмите на люк и поместите КОЛЬЦО ВИНЕГЛА на защелку (U).
Спуститесь в погреб.
Возьмите СИНЮЮ ТРУБУ (V).
Обратите внимание на бочки (W).
Нажмите на винную стойку и возьмите КРАСНУЮ ТРУБУ (X).
Посмотрите на стол слева (Y).
Поместите СТЕКЛЯННУЮ ТРУБУ в верхнюю часть центральной банки (@).
Поместите пустой кувшин слева (A).
Поместите ПУСТУЮ банку справа (B).
Поместите ДАТЧИК ДАВЛЕНИЯ в трубки над банкой (С).
Возьмите КЛЮЧ (D).
Поместите КРАСНУЮ ТРУБУ в банку (E).
Поместите СИНЮЮ ТРУБУ в кувшин (F).
Вернитесь наверх в таверну.
Используйте КЛЮЧ на запертом шкафу, затем выберите шкаф для поиска предметов.
Найдите все предметы в списке.
Используйте ткань на лампе, чтобы найти джина (G).
Вы получите ЖУРНАЛ ВИНОДЕЛАТЕЛЯ.
Вернитесь в погреб и посмотрите на бочки сзади.
Обратите внимание на даты на бочках (H).
Поместите ЖУРНАЛ ИЗВЕСТНИКА на подставку для книг (I).
Посмотрите на журнал для мини-игры.
Нажмите на аромат слева (J), затем следуйте линии к дате справа (K).
Нажмите на дату после каждого аромата, чтобы определить нужную бочку (1-7).
Красная роза — 1350 (л).
Выйдите из журнала и дважды нажмите на бочку с надписью 1350.
Посмотрите на стол слева.
Вам нужно 4 литра вина в кувшине слева.
Нажмите на клапан (M), чтобы заполнить центральную банку.
Нажмите на банку, которую хотите налить, затем нажмите на банку, в которую хотите ее налить.
Нажмите на центральную банку, затем налево.
Нажмите на левую банку, затем на правую.
Нажмите на правую банку, затем на центр.
Нажмите на левую банку, затем на правую.
Нажмите на центральную банку, затем налево.
Нажмите на левую банку, затем на правую.
Возьмите Кувшин с вином слева (N).
Вернитесь к кузнецу.
Дайте ПОЛНЫЙ ВИННЫЙ КУВШИН кузнецу (O).
Возьмите ЛОПАТУ (P).
Возьмите ПУСТОЕ ВЕДРО (Q).
Возьмите СИЛЫ (R).
Нажмите на ящики для поиска предметов (S).
Найдите все предметы в списке.
Используйте магнит, чтобы получить ключ (T).
Нажмите на бочку, чтобы найти железную маску (U).
Вы получите КУЛОЧКУ.
Выход из кузнеца.
Используйте ПУСТОЕ ВЕДРО на колодец (V).
Нажмите на рукоятку, чтобы опустить ведро (W).
Возьмите ВЕДРО ВОДЫ, как только оно вернется.
Войдите в сарай.
Примените ЛОПАТУ на угольном бункере, чтобы получить УГЛУБЛЕННЫЙ УГОЛЬ (X).
Вернитесь к кузнецу.
Поместите УГЛЕВЫЙ УГОЛЬ в камин (A).
Используйте СИЛЫ на камин (B).
Посмотрите на гриль и поместите ЛИЛИЮ ИЗОБРАЖЕННОЙ сверху (С).
Используйте ЩИПЦЫ на лилии, чтобы получить ГОРЯЧУЮ МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ЛИЛИЮ (D).
Посмотрите на наковальню и поместите ГОРЯЧУЮ МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ЛИЛИЮ сверху (E).
Используйте МОЛОТОК, затем возьмите ГОРЯЧУЮ МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ЛИЛИЮ (F).
Нажмите на корыто с водой и вылейте ВЕДРО ВОДЫ (G).
Поместите ГОРЯЧУЮ МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ЛИЛИЮ в воду, затем возьмите ХОРОШУЮ МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ФИГУРУ из желоба (H).
Появится кузнец и даст вам медальон кузнеца.
Вернитесь в библиотеку и пройдите в дыру в полу.
Посмотрите на сторону саркофага и поместите ХОРОШУЮ МЕТАЛЛИЧЕСКУЮ ФИГУРУ в углубление (I).
Сэр Чарльз передаст вам жетоны логики.
Вернитесь туда, где вы видели кота.
Осмотрите ворота и используйте ЖЕЛЕЗЫ ЛОГИКИ на замке для мини-игры (J).
Поместите жетоны в замок так, чтобы символы на 3 меньших жетонах (K) совпадали с символами на большем жетоне (L).
Идите вперед через ворота на кладбище.
Нажмите на забор и возьмите 1-е КАМЕННОЕ КОЛЬЦО (M).
Возьмите КАРМАННЫЕ ЧАСЫ МАРТИНА (N).
Пройдите назад дважды, затем пройдите налево в арку.
Дайте КАРМАННЫЕ ЧАСЫ МАРТИНА Бьянке (O).
Она даст вам медальон Бьянки.
Нажмите на ящик и возьмите РУЧКУ (P).
Пройдите назад, посмотрите на дверь башни и используйте РУЧКУ на дверь (Q).
Войдите в башню.
Возьмите 2-е КАМЕННОЕ КОЛЬЦО (R).
Обратите внимание на лестницу, ведущую вверх (S).
Нажмите на полки для поиска предметов (T).
Найдите все предметы в списке.
Поместите стрелки часов на часы, чтобы найти кукушку (U).
Вы получите НОЖНИЦЫ.
Вернитесь к арке.
Нажмите на сундук и используйте НОЖНИЦЫ на веревках (V).
Возьмите ВЕСНУ ЧАСОВ (W).
Вернитесь к башне и поднимитесь по лестнице, затем поднимитесь по лестнице на колокольню.
Возьмите 3-е КАМЕННОЕ КОЛЬЦО (X).
Возьмите ПЛИТКУ КОЛЛЕКЦИИ (Y).
Пройдите назад 5 раз туда, где вы видели оборотня, и посмотрите на гробницу справа.
Используйте плиту колокольчика на сетке для мини-игры (Z).
Восстановите мозаику, вращая плитки (A).
Нажмите на каждую плитку, чтобы вращать ее на месте.
Возьмите колокольчик из мозаики.
Вернитесь к колокольне.
Поместите колокольчик в колокол (B).
Нажмите на звонок, чтобы узнать, что он должен синхронизироваться с часами.
Спуститесь на один уровень вниз.
Используйте пружину ЧАСОВ на механизме часов для мини-игры (С).
Используйте красный щит (D), чтобы протолкнуть шестерни в белые круги в центре (E).
Нажмите на путь перед щитом в направлении, куда вы хотите двигаться.
Вы также можете нажать на освещенный край красного щита.
Левый, Правый, Вверх и Вниз сокращены как L, R, U и D.
Сделайте следующие шаги, чтобы попасть в положение, показанное на скриншоте (1): D1, L4, D2, R1, D2, L1, U1, D2, L2, U2, R3, D1, R1, U1, R2, U2, L1 U1, L3, D2, R1, D2, L1, D1, L2, U2, R2, U1, R1 и D1.
Левый, Правый, Вверх и Вниз сокращены как L, R, U и D.
Сделайте следующие шаги, чтобы войти в положение, показанное на скриншоте (2): L1, U2, L2, U1, R1, D1, R1, D2, L2, U1, D1, R2, U2, L1, U1, L2, D1 , R2, L1, D4, R1, D2, L1, U4, R4, D3, L2, U1, L2, D2, R1, U1, L1, U1, R1, D1, R1, U2, D1, L2, U2, R2 ,
Левый, Правый, Вверх и Вниз сокращены как L, R, U и D.
Сделайте следующие шаги, чтобы войти в положение, показанное на скриншоте (3): D3, R2, U3, R2, D2, R1, D1, L5, U2, R1, U1, R3, U2, L1, U2, R1, D6 , R1, D1, L4, R3, U3, L6, D4, R1, U1, L1, U1, R1, L1, U2, R6, D3, L4, U2, D1, L2, U2, R3.
Левый, Правый, Вверх и Вниз сокращены как L, R, U и D.
Сделайте следующие шаги, чтобы получить решение, показанное (4): L3, D4, R1, U1, L1, U1, R1, D1, R1, U2, D1, L2, U2, R2, D3, R4, U6, L4, D2 , U1, L2, U1, R5, U1, R1, D6, R1, D1, L5, U1, L2, D2, R1, U1, L1, U1, R1, D1, R1, U1, L2, U3, D4, R6 , U6, L7, D1, R2, U1, R1, D1.
Вернитесь на кладбище.
Нажмите на красный амулет в левом нижнем углу (F).
Найдите 7 рун.
Вы получите МЕДАЛЬОН МАРТИНА.
Посмотрите на землю у столбов для мини-игры (G).
Поверните стрелки, чтобы они все указывали на центр.
Нажмите на стрелку, чтобы повернуть ее; это может повлиять на другие стрелки.
Нажмите на следующие стрелки, H x 3, I x 2 и J x 3.
Посмотрите на столб, который поднимается, и поместите 3 КАМЕННЫХ КОЛЬЦА в круг для мини-игры.
Вращайте кольца, чтобы правильно расположить символы.
Чередуйте черный и белый, а также количество сторон, но имеют аналогичное качество, как точка в центре (K).
Войдите в проход.
Глава 4: Подземный
Возьмите НЕЗАКОННЫЙ ФАКЕЛ (A).
Возьмите ГАФФ (B).
Пройти вперед.
Возьмите ДОЛОТО (С).
Нажмите на мой автомобиль для поиска предметов (D).
Найдите все предметы в списке.
Используйте щетку на ботинок, чтобы сделать блестящий ботинок (E).
Вы заработаете ПРЕДОХРАНИТЕЛЬ.
Пройдите назад 4 раза и войдите в арку.
Используйте ФАКЕЛ на бочку, чтобы получить ФАКЕЛ со смолой (F).
Пройдите назад, затем перейдите на второй уровень колокольни.
Посмотрите на пол и используйте ДОЛОТО на доску (G).
Возьмите отмычки из отверстия (H).
Вернитесь в сарай кузнеца.
Используйте отмычки на сейф (I).
Возьмите бочку с порохом (J).
Вернитесь на кладбище и войдите в подполье.
Используйте ФАКЕЛ со смолой на настенном факеле, чтобы получить ФАКЕЛ (K).
Обратите внимание на Посох Асклепия (L).
Пройти вперед.
Нажмите на обломки и поместите бочку с порохом на землю (M).
Используйте ПРЕДОХРАНИТЕЛЬ на бочку (N).
Используйте ФАКЕЛ на предохранитель (O).
Пройти вперед.
Поговорив с Хедериком (P), вы получите ПЕЧАТЬ ХЕДЕРИКА.
Посмотрите на мою машину и возьмите гаечный ключ (Q).
Пройти вперед.
Возьмите ЗОЛОТУЮ ЗМЕЮ (R).
Возьмите КАМЕННУЮ ПЛИТКУ (S).
Пройдите назад 5 раз.
Нажмите на скамью и поместите ПЕЧАТЬ ХЕДЕРИКА в нишу (T).
Возьмите 3-ю СТАТУЭТКУ (U).
Вернитесь на второй уровень церковной башни.
Осмотрите замок и используйте гаечный ключ на болт (V).
Возьмите МАСЛЕНКУ (W).
Вернитесь на сцену с Хедериком.
Обратите внимание на ось водяного колеса (X).
Нажмите на платформу справа от водяного колеса и поместите КАМЕННЫЕ ПЛИТКИ поверх остальных (Y).
Нажмите на панель, которая открылась для мини-игры (Z).
Переместите веса с левой на правую платформу.
Переместить один вес за один раз; веса не могут быть помещены на меньший вес.
Перетащите груз, который вы хотите переместить на другую платформу.
Помечая 3 платформы A, B и C, переместите верхний груз в штабель в следующем порядке.
От A до C, от A до B, от C до B, от A до C, от B до A, от B до C, от A до C, от A до B, от C до B, от C до A, от B до A, от C до B, от A до C, от A до B, от C до B, от A до C, от B до A, от B до C, от A до C, от B до A, от C до B, от C до A, от B до A, от B до C, от A до C, От A до B, от C до B, от A до C, от B до A, от B до C, от A до C.
Посмотрите на водяное колесо и используйте МАСЛЕНКУ на передачах.
Пройти вперед.
Нажмите на ящик и возьмите 4-ую СТАТУЭТКУ (D).
Нажмите на контроль для мини-игры (E).
Вращайте плитки, чтобы создать 2 вертикальных пути, чтобы рычаг мог опуститься.
Нажатие на 1 из 9 внутренних плиток заставит окружающие плитки вращаться вокруг нее.
Нажмите на следующие места: H x 3, G x 4, F, I, J, K, G, K, G, F, I x 3, F x 3, G x 2, K x 7, I, Gx6, и Fx2.
Пройдите через правую арку.
Нажмите на красный амулет в левом нижнем углу (L).
Найдите 6 рун.
Обратите внимание на недавно сформированный мост (M).
Возьмите КИРКУ (N).
Нажмите на сундук для поиска предметов (O).
Найдите все предметы в списке.
Вы получите КЛЮЧ ОТ ШКАФА.
Идите вперед через мост.
Используйте КИРКУ, чтобы получить 1-ЫЙ СВЕТЯЩИЙСЯ КРИСТАЛЛ (P).
Посмотри в бассейн; используйте ГАФФ, чтобы получить МЕДАЛЬОН ЧАРЛЬЗА (Q).
Идите вниз, вправо, затем идите вперед.
Осмотрите шкаф и используйте КЛЮЧ от ШКАФА на замке (R).
Осмотрите шкаф и возьмите ЗОЛОТОЙ КУБОК (S).
Идите вниз, вправо, пройдите вперед дважды, затем снова вниз.
Используйте КИРКУ, чтобы получить 2-ЫЙ СВЕТЯЩИЙСЯ КРИСТАЛЛ (T).
Пройдите назад 3 раза.
Посмотрите на Посох Асклепия на стене (U).
Поместите ЗОЛОТУЮ ЗМЕЮ и ЗОЛОТУЮ ГОЛОВУ в углубления для мини-игры (V).
Восстановите мозаику, сдвинув плитки в нужное положение.
Нажмите на плитку, чтобы вставить ее в соседнее пустое место.
Эта мини-игра рандомизирована — ваше решение может отличаться.
Нажмите на плитки в следующем порядке:
5-9-10-6-7-11-15-14-13-9-5-1-2-3-4-8-12-11-15.
16-12-8-7-11-15-16-12-8-4-3-2-1-5-9-13-14-15-16-12.
8-7-6-5-9-1-14-13-9-5-6-10-11-12-16.
15-14-13-9-5-1-2-3-4-8-7-6-10-11-12-8-7-6-10-11.
12-8-4-3-2-1-5-9-13-14-15-16-12-8-7-11-1.
9-13-14-15-16-12-8-4-3-2-1-5-6-10-11-15-14-13-9.
5-1-2-3-4-8-12-11-9-5-6-10-9-5-6-10-11-12.
Возьмите ЧЕРЕП из отсека, который открывается.
Выйдите из крупного плана, затем спуститесь 3 раза к центру деревни и посмотрите на фонтан.
Поместите 4 СТАТУЕТКИ на 4 пьедестала в фонтане (W).
Осмотрите переднюю панель фонтана для мини-игры (X).
Решите уравнения в нижней части (A) и поверните верхние диски на правильный символ (B).
Первое уравнение говорит нам, какой символ равен 3, поэтому поверните 3-й циферблат на этот символ (C).
В третьем уравнении символ вычитается из другого и равен 3. Поскольку у нас уже есть символ для 3, эти два символа должны быть 4 и 1, поэтому измените 1-й и 4-й диски на эти символы (D).
Процесс исключения дает нам второй символ (E).
Нажмите на фонтан, чтобы собрать СИМВОЛ ЖИЗНИ.
Вернитесь на сцену с Хедериком.
Дайте СИМВОЛ ЖИЗНИ Хедерику (F).
Вы получите МЕДАЛЬОН ХЕДЕРИКА.
Используйте КИРКУ, чтобы взять 3-й СВЕТЯЩИЙСЯ КРИСТАЛЛ (G).
Идите вперед, затем войдите в левое отверстие.
Посмотрите на столб в центре комнаты для мини-игры.
Вращайте каменные кольца, чтобы создать путь вниз по центру.
Нажмите на кольца, чтобы повернуть их; нажатие на кольцо повлияет на другие кольца.
Нажмите на следующие кольца: H x 2, J x 1, K x 2, I x 2, H x 2 и L x 1.
Нажмите на колонну и поместите ЧЕРЕП сверху (M).
Как только фиолетовая энергия войдет в череп, снова посмотрите на колонну и возьмите СИМВОЛ СМЕРТИ (N).
Идите вперед к Аркивию (O).
Поместите 3 СВЕТЯЩИХСЯ КРИСТАЛЛА в 3 отверстия (P).
Обратите внимание на правый квадрат (Q).
Нажмите на левый квадрат для мини-игры (R).
Заполните все ряды светом.
Нажмите на квадрат, затем идите в любом направлении; свет прекратится только тогда, когда он встретит препятствие.
Нажмите на начальный квадрат (S) и следуйте по пути до конца (T).
Выберите правильную коробку для другой мини-игры.
Заполните все ряды светом.
Нажмите на квадрат, затем идите в любом направлении; свет прекратится только тогда, когда он встретит препятствие.
Нажмите на начальный квадрат (U) и следуйте по пути до конца (V).
Вы получите МЕДАЛЬОН АРКИВИЯ.
Пройдите назад и пройдите через правую арку.
Дайте СИМВОЛ СМЕРТИ Лоренцо (W).
Вы получите медальон Лорензо.
Пройдите назад 12 раз, затем пройдите в большой зал и посмотрите на стол.
Поместите каждый из 9 МЕДАЛЬОНОВ в углубления на столе (X).
Вы услышите от каждого опекуна, как вы их разместите.
Вернитесь к столу после сцены и поместите следующий МЕДАЛЬОН.
Спуститесь по лестнице под столом.
Поместите ЗАПИСАННУЮ КНИГУ СЕКРЕТОВ на пьедестал (A).
Нажмите на панель «9», чтобы открыть ее (B).
Осмотрите панель и возьмите ВОЛШЕБНОЕ СТЕКЛО (С).
Используйте ВОЛШЕБНОЕ СТЕКЛО на книгу (D).
Переместите волшебный стакан назад и вперед, чтобы показать текст и изображение (E).
Перемещайте стакан, пока он не отнимется у вас.
Обратите внимание на подсвеченные символы слева (F).
Осмотрите панель и нажмите символы, которые были выделены в книге (G).
Стекло разобьется вокруг артефакта.
Нажмите на красный амулет в левом нижнем углу (H).
Найдите 7 рун.
Возьмите ТЕМНЫЙ БОКОВЫЙ ИСКУССТВО (I).
Вернитесь к круглой двери, в которую вы поместили 3 светящихся кристалла.
Используйте ТЕМНО-СТОРОННУЮ АРТЕФАКТУ на дракона (J).
Ваш курсор будет выглядеть как артефакт (K).
Нажмите на летающие черепа, чтобы уничтожить их (L).
Как только вы уничтожите волну летающих черепов, один из кристаллов начнет ударять дракона (M).
Есть 3 волны летающих черепов, которые нужно уничтожить.
Примечание — дракона иногда можно победить, нажав на 3 кристалла.
Поздравляем! Вы завершили 9: Темная сторона.
9 Драконов — онлайн игра, официальный сайт, регистрация в игре
Название онлайн игры: 9 Драконов
Официальный сайт: www.9donline.ru
Жанр: MMORPG, основана на древнекитайской мифологии
Тип: бесплатная. Необходимо скачать клиент игры
Обзор игры:
«9 Драконов» представляет собой весьма популярное во всем мире действо в жанре MMO, преподнесенное геймерам азиатскими разработчиками. Онлайн игра полностью локализована для русскоязычной аудитории и является абсолютно бесплатной.
Онлайн игра «9 Драконов» откроет игрокам мир Древнего Китая и возможность погрузиться в увлекательные схватки с использованием множества видов боевых искусств, начиная с рукопашного боя и заканчивая высшими видами владения разным оружием.
Начав игру, каждый имеет возможность создать своего уникального «героя». Его можно улучшать и экипировать полностью на свой вкус. Определившись с персонажем, следует выбрать стартовую локацию. Всего их шесть. В принципе, абсолютно не важно, с какой начнется игра.
Не обязательно и сразу вступать в клан. Для начала можно поосмотреться. Кланов в игре тоже шесть: три темных – Лиги Бродяг, Монахов Шаолиня и У-Танов и столько же светлых – кланы Священного Цветка, Братства Воров и Небесного Демона.
А вот выбрать свой путь развития важно в самом начале. Таковых в игре всего четыре. Можно стать Мистиком, Воином, Мудрецом или Мастером Цигун. От выбора пути будет зависеть развитие характеристик персонажа и вступление в клан.
Основная часть игры «9 Драконов» — это выполнение квестов. Они представлены в большом разнообразии и делают игру увлекательной и лишенной рутины. Кроме того, масса оружия, вспомогательных предметов, бонусов и прочее. Все это обеспечивает полное погружение в игровой процесс, занимательное действо, хорошее настроение, а так же приятное и полезное времяпровождение.
Скриншоты:
9 Драконов регистрация аккаунта:
Для того, чтобы начать играть, Вам необходимо зарегистрироваться на официальном сайте 9 Драконов (ссылка на офф сайт в начале этой страницы). Для повышения производительности соединения с сервером игры, Вам необходимо скачать клиент игры и проинсталлировать его на своем компьютере. Зарегистрировать игровой аккаунт Вы сможете нажав на следующую картинку. Она перенаправит вас на форму регистрации в игре «9 Драконов».
Создав аккаунт, Вы получите возможность играть на официальном русском сервере, а так же получать уведомления по почте о игровых нововведениях, новостях и прочей информации по игре.
Скачать игру 9 Драконов бесплатно:
Если у Вас возникнут проблемы при создании аккаунта, с запуском игры или уже в процессе самой игры, Вы можете обратится в раздел «Поддержка» официального сайта «9 Драконов» и воспользовавшись соответствующей формой — получить ответы на все поставленные Вами вопросы.
Видео обзоры игры:
Официальный трейлер к игре
Видео с обучением начинающих игроков от игрового гида
Мувик из игры: демонстрация игрового процесса от первого лица
Системные требования:
Операционная система (платформа): Windows 2000/XP/Vista x32/Seven
Процессор: Intel Pentium IV 1 Ghz
Видеокарта: 64 Mb
Оперативная память: 512 Mb
Свободное место: 1 Gb
Развивающие игры с ребенком от 9 месяцев до 1 года. Часть 1 – Жили-Были
Наверняка, вы сталкивались с такой ситуацией: у вас есть время и желание позаниматься с малышом, игрушек у вас каких только нет, но чем именно заняться, чтобы игра была максимально полезна для вашего чада, вы не знаете. Действительно, чтобы малыш активно развивался, важно, чтобы игрушки были хорошо подобраны по возрасту и чтобы ваши занятия соответствовали познавательным потребностям ребенка в конкретный период. В этой статье я расскажу
- на развитие каких навыков стоит обратить внимание в этом возрасте;
- какие развивающие игрушки и материалы для этого необходимы.
Сразу хочу заметить, что в этой статье рассмотрены не все игры, остальные можно найти во второй части статьи.
Что нового в развитии ребенка с 9 месяцев?РАЗВИВАЮЩИЕ ИГРЫ С РЕБЕНКОМ 9 МЕСЯЦЕВ И СТАРШЕ. ЧАСТЬ 2 — ЧИТАТЬ
С 9 месяцев начинается принципиально новый этап в развитии ребенка, в частности меняется характер его взаимодействия с предметами. До сих пор ваш малыш преимущественно хватал и разбрасывал игрушки и все, что попадалось ему под руку. Ребенка привлекали разнообразные цвета, формы предметов, их хотелось хорошенько рассмотреть, потрогать, потрясти, бросить. Но теперь малыш начинает понимать, что помимо всего прочего, эти вещи еще и выполняют различные функции, могут быть использованы с какой-то целью. Кубики можно не только разбросать, но и построить из них башню. А пультом, оказывается, можно еще и телевизор включить. В этот период у малыша, наконец, появляется желание к созидательной деятельности. Впервые можно увидеть у ребенка стремление сложить что-то в коробочку, закрыть ее, нанизать кольца на пирамидку.
Поэтому одна из основных ваших задач, начиная с этого возраста – создать для ребенка соответствующую развивающую среду. А это значит, во-первых, предложить подходящие по возрасту и интересные для ребенка развивающие игрушки. А во-вторых, не запрещать малышу познавать огромное разнообразие других окружающих его предметов, не бросаться на него с криками «Нельзя!» при любой его попытке потрогать что-то новое (подробнее об употреблении слова «нельзя»). Те вещи, которые представляют опасность для ребенка, или те, которые вам очень ценны и дороги, нужно просто заранее убрать из зоны досягаемости крохи.
И так, как развивать ребенка в 9 месяцев:
1. Нанизываем / снимаем колечки с пирамидкиПоначалу малыш, конечно, будет только снимать кольца с палочки, но чем чаще он будет видеть, как вы нанизываете колечки, тем быстрее он начнет делать это сам. Не ждите, что ребенок сразу соберет всю пирамидку, первое время он будет терять интерес к игре уже после того, как наденет пару колец. Постепенно запас его терпения будет увеличиваться.
На данном этапе нет необходимости объяснять малышу, в каком порядке нужно надевать кольца на стержень. Сейчас наша основная задача – просто отработать действие нанизывания.
2. Вкладываем/выкладываем небольшие предметы из коробочки или другой тарыДля этой развивающей игры вам понадобятся разнообразные коробочки, баночки, корзиночки. Тара должна быть не слишком маленькой, чтобы рука ребенка в нее свободно помещалась, малышу должно быть удобно вкладывать в нее небольшие предметы: кубики, шарики, деревянные грибочки, да и собственно любые маленькие игрушки. Главное, нужно помнить, что если вы даете малышу игрушки слишком маленькие (меньше 3-4 см), нельзя оставлять его без присмотра!
Вот еще интересный вариант игры. Сложите несколько небольших игрушек в мешок и предложите малышу, опуская руку в мешок, доставать из него игрушки. Если вы возьмете непрозрачный мешок, появится элемент сюрприза, что очень нравится детям.
3. Открываем/закрываем коробочки, баночки, матрешкиЗдесь пригодятся такие коробки, которые проще всего открыть. Лучше всего подойдут картонные коробочки, закрывающиеся внахлест, матрешки (Лабиринт, My-shop, KoroBoom). Старайтесь давать такие баночки и коробочки, которые не слишком туго открываются, чтобы малыш не разочаровался, так и не открыв коробку. Чтобы подогреть интерес ребенка, в коробочку можно вложить какой-нибудь сюрприз – маленькую игрушку.
Ну и, конечно, нельзя забывать про полезность игры с предметами быта! Большинство мам замечают, что дома дети безумно любят играть с кастрюлями, крышками и прочей кухонной утварью. Поэтому если уж малыш забрался в ваш кухонный шкаф, и там нет ничего опасного, то не запрещайте ему там играть, для него это большое удовольствие и возможность вдоволь попрактиковаться в открывании/закрывании кастрюль и баночек, во вкладывании/выкладывании предметов. А для вас – это долгожданная свободная минутка!
4. Стучим предметами друг об другаНа первый взгляд кажется, что здесь ничего сложного. Однако для малыша в самом начале данного возрастного периода это не простое задание – нужно уметь одновременно координировать движения обеих рук. Поэтому во время игры показывайте ребенку, как вы стучите, например, небольшими кубиками друг об друга. Подойдут также деревянные погремушки или любые игрушки, которые помещаются в ладони малыша.
5. Составляем кубики друг на другаИменно в этом возрасте вы, скорее всего, увидите первую башню вашего малыша из 2-3 кубиков. Но, конечно, он не научится этого делать, если не увидит, как это делаете вы. Так что обязательно показывайте вашему чаду, как при помощи нескольких кубиков можно соорудить целую башню.
6. Катаем машинкуРодители мальчика, скорее всего и так первым делом купили малышу машинку и научили возить ее по полу. Но вот девочкам везет меньше, часто им совсем не покупают машинки, просто потому, что так не принято. Также как и не принято покупать мальчикам кукол. Но малышу нужно познавать мир через самые разные предметы, учиться пользоваться ими. До трех лет нет необходимости делать существенных половых различий в воспитании мальчика и девочки. Если вы будет следовать всем предрассудкам, вы просто лишите ребенка какой-то частицы опыта. Катание машинки – еще один способ взаимодействия с предметом, который будет полезно освоить малышу для всестороннего развития.
***
У своей дочери слегка изменившееся отношение к игрушкам я заметила ровно в 9 месяцев. Если раньше пирамидка интересовала ее исключительно с точки зрения «погрызть колечки», то в 9 месяцев она, только увидев пирамидку, начинала ее разбирать, снимая поочередно кольцо за кольцом, небольшие игрушки, лежащие в коробочке, тоже непременно нужно было достать. Стоило мне только начать что-нибудь складывать, дочь обязательно все разбирала обратно. Спустя месяц такого «разбирания» появился и долгожданный интерес к созидательной деятельности – она стала нанизывать колечки на стержень, складывать предметы в тару, строить свои первые башни из кубиков (по 2-3 кубика).
На этом прощаюсь! И не забудьте посмотреть продолжение этой статьи
РАЗВИВАЮЩИЕ ИГРЫ С РЕБЕНКОМ 9 МЕСЯЦЕВ И СТАРШЕ. ЧАСТЬ 2
Также рекомендую посмотреть
ПОДБОРКА КНИГ ДЛЯ ДЕТЕЙ ДО ГОДА
ИГРЫ И ЗАНЯТИЯ С РЕБЕНКОМ 9 МЕСЯЦЕВ — ПОДРОБНЫЙ ПЛАН
С уважением, Яна Разначенко
(Arg) 9-Sh3 superbinder: новое многообещающее противоопухолевое средство для лечения меланомы путем блокирования передачи сигналов фосфотирозина | Journal of Experimental & Clinical Cancer Research
Конструирование, экспрессия и очистка слитых белков GST
Гены, кодирующие человеческий дикий тип и тройной мутантный домен Src Sh3, из плазмид pEGFP-C3-Src Sh3 Wt / TrM, были субклонированы в вектор pGEX-4 T3 для экспрессии белков GST-Src Sh3 Wt / TrM. На основе одного pGEX-4 T3 или pGEX-4 T3- Src-Sh3 Wt / TrM были сконструированы рекомбинантные плазмиды для экспрессии GST- (Arg) 9 , GST-Src-Wt / TrM- (Arg) 9 .Wt представляет дикий тип. Аминокислотные последовательности и праймеры всех использованных конструкций были перечислены в Дополнительном файле 1: Таблица S1 и Дополнительном файле 2: Таблица S2 дополнительных материалов. Как показано в Дополнительном файле 1: Таблица S1, хотя нона-аргинины были помещены в конец C-конца GST или GST-Src-Sh3 Wt / TrM, мы назвали их (Arg) 9 -GST или (Arg ) 9 -GST-Src-Sh3 Вес / ТрМ.
Все амплифицированные продукты очищали в геле с использованием набора для очистки гелевых лент (Beijing ComWin Biotech).Каркас расщепляли BamHI (№ по каталогу R3136V) и NotI (№ по каталогу R3189V) при 37 ° C в течение 2 часов, и очищенные продукты ПЦР подвергали взаимодействию с линеаризованным вектором pGEX-4 T3 при 37 ° C в течение 30 минут. В эксперименте используется набор One Step Cloning Kit (Vazyme, Nanjing) в соответствии с принципом гомологичной рекомбинации. E .coli BL21, содержащий экспрессионную плазмиду, выращивали в бульоне LB со 100 мкг / мл ампициллина при 37 ° C. Экспрессию слитого белка GST индуцировали добавлением изопропил-β-D-тиогалактозида (0.5 мМ конечная концентрация), а затем инкубировали при 20 ° C в течение 18 часов. Буфер для лизиса белка содержит 20 мМ трис-HCl (pH 7,0), 50 мМ NaCl, 0,5 мМ EDTA, 1 мМ дитиотреитол (DTT), 1 мМ коктейль и 1 мМ PMSF. Слитые белки GST очищали из лизатов бактериальных клеток с помощью гранул глутатион-агарозы. После обработки ультразвуком лизаты клеток очищали центрифугированием при 9500 об / мин в течение 30 мин перед смешиванием с гранулами глутатион-агарозы. После вращения при 4 ° C в течение 3 часов белки могут быть элюированы и собраны.Концентрацию белка в клеточных гомогенатах определяли количественно с помощью набора для анализа белков BCA. Непосредственно перед их использованием в биологических анализах чистоту белка проверяли с помощью SDS-PAGE с использованием интенсивности окрашивания кумасси бриллиантовым синим.
Клеточные линии и культура клеток
Клетки меланомы B16F10 (без метастазирующего варианта меланомы мыши), A375 (мутация BRAF) были приобретены из Американской коллекции типовых культур (ATCC, Manassas, VA). Подлиния A375 / DDP, резистентная к цисплатину (DDP), была установлена при непрерывном воздействии на родительские клетки A375 возрастающих концентраций цисплатина в диапазоне от 2 нМ до 4 мкМ в течение примерно 6 месяцев.Устойчивые к лекарственным средствам клетки поддерживали в среде DMEM, содержащей 4 мкМ цисплатина. Все клетки культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS и 100 Ед / мл пенициллин-стрептомицина и поддерживали во влажной атмосфере с 5% CO2 при 37 ° C.
Глутатион-s-трансфераза «pull down» и вестерн-блоттинг
Для анализа «GST pull down» слитые белки GST были экспрессированы в E. coli BL21 (DE3). Клетки обрабатывали ингибитором фосфатазы перванадатом натрия (0,5 мМ) в течение 10 мин при 37 ° C перед сбором.Затем клетки лизировали в ледяном буфере для лизиса (0,5% NP-40, 50 мМ Hepes (pH 7,4), 1 мМ хлорид магния, 150 мМ KCl и полный коктейль ингибиторов протеазы). Для иммунопреципитации и вестерн-блоттинга (иммуноблот) клетки лизировали на льду в буфере для лизиса (1% NP-40, 50 мМ трис-HCl (pH 7,4), 150 мМ NaCl, 2 мМ EDTA, 50 мМ NaF, 10% глицерин, и полный коктейль ингибиторов протеазы). Супернатант собирали после центрифугирования при 12000 g в течение 15 мин. Протеин A / G агароза (Thermo Fisher) и шарики глутатион-сефарозы (GE Healthcare) использовали для иммунопреципитации и анализов GST pull down соответственно.Концентрации белка определяли количественно методом BCA. Белки разделяли с помощью 10% SDS-полиакриламидного геля и электропереносили на PVDF-мембраны (Millipore), которые инкубировали в 5% обезжиренном молоке в течение 1 ч при комнатной температуре. Первичные антитела против EGFR (CST # 4267), Grb2 (CST # 3972), pERK1 / 2 (CST # 4370), pSTAT3 (CST # 4113), pAKT (CST # 4060), AKT (CST # 9272), ERK1 / 2 (CST # 4695), STAT3 (CST # 4904), антитело pY (Abcam EPR16871), GAPDH (CST # 5174), Bax (ABclonal # A12009) и Bcl2 (ABclonal # A11025) разводили в соотношении 1: 1000, а затем инкубировали с мембраны в течение ночи при 4 ° C.Мембраны промывали трижды в течение 10 мин и инкубировали с разведением 1: 5000 конъюгированных с HRP антимышиных или антикроличьих антител. Блоты трижды промывали TBST и проявляли с помощью системы ECL; мембраны подвергали воздействию ChemiDoc MP Imager (BIO-RAD). Плотности полос нормализовали относительно соответствующего GAPDH с помощью программного обеспечения Image J.
Иммунофлуоресценция
1 × 10 4 клеток высевали в 12-луночный планшет и культивировали в течение 24 часов. Клетки инкубировали с белками в разное время и в разных концентрациях.После промывки холодным промывочным буфером клетки затем фиксировали в 4% формальдегиде при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем повышали проницаемость с помощью 0,5% Triton X-100 в течение 20 минут. После промывания в PBS клетки обрабатывали родамином фаллоидином в течение 30 минут, а затем инкубировали с DAPI в течение 5 минут при комнатной температуре. Образцы получали с помощью флуоресцентного микроскопа (Olympus, Япония). Изображения были проанализированы с помощью программного обеспечения Image J.
МТТ-анализ
Клетки, собранные в логарифмической фазе, помещали в 96-луночные планшеты (3-5 × 10 3 клеток / лунку).На следующий день добавьте слитые белки GST в среду для культивирования клеток. После инкубации в течение разного времени в каждую лунку добавляли 10 мкл 5 г / л растворов МТТ (Sigma) и инкубировали в течение 4 ч, а затем инкубировали со 100 мкл ДМСО в течение еще 15 мин. Оптическое поглощение измеряли на длине волны 570 нм. В подписях к фигурам показаны разное время обработки и концентрации.
CCK-8 assay
Клетки, собранные в логарифмической фазе, помещали в 96-луночные планшеты (5 × 10 3 клеток / лунку).На следующий день добавьте слитые белки GST в среду для культивирования клеток с различными концентрациями. После инкубации в течение различного времени в каждую лунку добавляли 10 мкл раствора CCK-8 (Dojindo) и инкубировали в течение 1-4 часов. Оптическое поглощение измеряли на длине волны 450 нм.
Анализ образования колоний
Клетки обрабатывали трипсином и высевали в 6-луночные планшеты (100 клеток / лунку), инкубировали со слитыми белками GST и подсчитывали через 14 дней после посева. Затем колонии фиксировали 4% формальдегидом и окрашивали 0.01% кристаллический фиолетовый на 10 мин.
Анализ заживления ран
Клетки высевали в шестилуночные планшеты (5 × 10 5 клеток / лунку). Затем с помощью наконечников для пипеток на 200 мкл создавали раны. Поцарапанные клетки трижды удаляли PBS. Затем клетки культивировали в течение 16 ч, инкубируя в присутствии или в отсутствие (Arg) 9 -GST Sh3 TrM. Микроскопические изображения были сделаны цифровой камерой в разные моменты времени.
Transwell assay
2 × 10 4 клеток помещали в 200 мкл среды DMEM, содержащей 2% FBS, в верхней камере.Нижняя камера была заполнена 500 мкл завершенной среды, содержащей 10% FBS. (Arg) 9 -GST Sh3 TrM или (Arg) 9 -GST добавляли в верхнюю камеру и клеткам позволяли мигрировать в течение 16 часов при 37 ° C с 5% CO2. Клетки фиксировали 4% формальдегидом в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем клетки в верхней камере перемещали ватным тампоном. После промывки камер ddH 2 O клетки, оставшиеся на дне нижней камеры, были окрашены 0,1% кристаллическим фиолетовым.Мигрировавшие клоны фотографировали под микроскопом. Подсчитывали количество клеток в трех разных областях.
Анализ апоптоза
Клетки осаждали центрифугированием, ресуспендировали и фиксировали в 100 мкл связывающего буфера. Плотность клеток в клеточной суспензии доводили до 2 × 10 3 клеток / мкл. Затем к суспензии клеток добавляли 5 мкл аннексина V-FITC с последующим осторожным встряхиванием и инкубацией в течение 10 минут при комнатной температуре в темноте. После этого клеточную суспензию инкубировали с 5 мкл пропидиумиодида.Все подробности должны быть указаны в инструкциях к набору (Tianjin Sungene Biotech). Клетки немедленно анализировали с использованием проточного цитометра FACS (FACS BD Biosciences, Германия) на предмет связывания аннексина V-FITC и пропидиумиодида. Точечные графики и гистограммы анализировали с помощью программного обеспечения Flowjo.
TdT-UTP для мечения на конце концов (TUNEL) проводили с помощью набора для одноэтапного анализа апоптоза TUNEL, произведенного Beyotime Institute of Biotechnology, в соответствии с инструкциями производителя. TUNEL-позитивные клетки, меченные FITC, были визуализированы под флуоресцентным микроскопом (Olympus, Япония).Клетки с зеленой флуоресценцией были определены как апоптотические клетки. И изображения были проанализированы с помощью программного обеспечения Image J.
Исследования на животных
Модель ксенотрансплантата была создана на мышах C57Bl / 6 (Центр животных Медицинского колледжа Тунцзи, Ухань) в возрасте 4–6 недель и весом примерно 18–22 г. Все исследования с участием животных проводились в соответствии с Национальными руководствами по уходу и использованию лабораторных животных и одобрены Комитетом по уходу и использованию институциональных животных Медицинского колледжа Тунцзи, Университета науки и технологий Хуачжун.
Суспензию 1 × 10 6 клеток B16F10 (в 100 мкл PBS) вводили подкожно в правый бок каждой мыши. После развития легко пальпируемой опухоли (7–10 дней, примерно 5 мм в диаметре). Размер опухоли измеряли с помощью штангенциркуля каждые 3 дня и рассчитывали по следующей формуле: объем опухоли = 1/2 (ширина) 2 × длина. Мышей разделили на контрольную группу (клетки B16F10 и инъекции PBS) и экспериментальную группу (обработанные клетки B16F10 и (Arg) 9 -GST Sh3 TrM), n = 3 на группу.Животных умерщвляли, когда размер опухоли достигал этической конечной точки.
Получение PBMC
Периферическая кровь, полученная от здоровых мышей C57Bl / 6, подвергалась антикоагуляции гепарином. РВМС выделяли центрифугированием периферической венозной крови в градиенте плотности Ficoll (Германия). Клетки промывали три раза и ресуспендировали в среде DMEM с добавлением 1 мМ пирувата натрия, 1% заменимых аминокислот и витаминов, 2 мМ L-глутамина, 100 ед. / Мл пенициллина-стрептомицина и 10% FBS.
Статистический анализ
Тест Стьюдента использовался для проверки статистической значимости различий между различными параметрами группы. P Значения менее 0,05 считались статистически значимыми.
(Arg) 9, маркировка FAM, Anaspec Inc. | VWR
Положения и условия
Спасибо, что посетили наш сайт. Эти условия использования применимы к веб-сайтам США, Канады и Пуэрто-Рико (далее «Веб-сайт»), которыми управляет VWR («Компания»).Если вы заходите на веб-сайт из-за пределов США, Канады или Пуэрто-Рико, пожалуйста, посетите соответствующий международный веб-сайт, доступный по адресу www.vwr.com, для ознакомления с применимыми условиями. Все пользователи веб-сайта подчиняются следующим условиям использования веб-сайта (эти «Условия использования»). Пожалуйста, внимательно прочтите эти Условия использования перед доступом или использованием любой части веб-сайта. Заходя на веб-сайт или используя его, вы соглашаетесь с тем, что вы прочитали, поняли и соглашаетесь соблюдать настоящие Условия использования с поправками, которые время от времени вносятся, а также Политику конфиденциальности компании, которая настоящим включена в настоящие Условия. использования. Если вы не желаете соглашаться с настоящими Условиями использования, не открывайте и не используйте какие-либо части веб-сайта.
Компания может пересматривать и обновлять настоящие Условия использования в любое время без предварительного уведомления, разместив измененные условия на веб-сайте. Продолжение использования вами веб-сайта означает, что вы принимаете и соглашаетесь с пересмотренными Условиями использования. Если вы не согласны с Условиями использования (в которые время от времени вносятся поправки) или недовольны Веб-сайтом, ваше единственное и исключительное средство правовой защиты — прекратить использование Веб-сайта.
Использование сайта
Информация, содержащаяся на этом веб-сайте, предназначена только для информационных целей. Хотя считается, что информация верна на момент публикации, вам следует самостоятельно определить ее пригодность для вашего использования. Не все продукты или услуги, описанные на этом веб-сайте, доступны во всех юрисдикциях или для всех потенциальных клиентов, и ничто в настоящем документе не предназначено как предложение или ходатайство в какой-либо юрисдикции или какому-либо потенциальному покупателю, где такое предложение или продажа не соответствует требованиям.
Приобретение товаров и услуг
Настоящие Условия и положения распространяются только на использование веб-сайта. Обратите внимание, что условия, касающиеся обслуживания, продаж продуктов, рекламных акций и других связанных мероприятий, можно найти по адресу https://us.vwr.com/store/content/externalContentPage.jsp?path=/en_US/about_vwr_terms_and_conditions.jsp , и эти условия регулируют любые покупки продуктов или услуг у Компании.
Интерактивные функции
Веб-сайт может содержать службы досок объявлений, области чата, группы новостей, форумы, сообщества, личные веб-страницы, календари и / или другие средства сообщения или коммуникации, предназначенные для того, чтобы вы могли общаться с общественностью в целом или с группой ( вместе «Функция сообщества»).Вы соглашаетесь использовать функцию сообщества только для публикации, отправки и получения сообщений и материалов, которые являются надлежащими и относятся к конкретной функции сообщества. Вы соглашаетесь использовать веб-сайт только в законных целях.
A. В частности, вы соглашаетесь не делать ничего из следующего при использовании функции сообщества:
1. Оскорблять, оскорблять, преследовать, преследовать, угрожать или иным образом нарушать законные права (например, право на неприкосновенность частной жизни и гласность) других.
2. Публиковать, размещать, загружать, распространять или распространять любую неуместную, непристойную, дискредитирующую, нарушающую авторские права, непристойную, непристойную или незаконную тему, название, материал или информацию.
3. Загружайте файлы, которые содержат программное обеспечение или другие материалы, защищенные законами об интеллектуальной собственности (или правами на неприкосновенность частной жизни), если вы не владеете или не контролируете права на них или не получили все необходимое согласие.
4. Загрузите файлы, содержащие вирусы, поврежденные файлы или любое другое подобное программное обеспечение или программы, которые могут повредить работу чужого компьютера.
5. Перехватить или попытаться перехватить электронную почту, не предназначенную для вас.
6. Рекламировать или предлагать продавать или покупать какие-либо товары или услуги для любых деловых целей, если такая функция сообщества специально не разрешает такие сообщения.
7. Проводите или рассылайте опросы, конкурсы, финансовые пирамиды или письма счастья.
8. Загрузите любой файл, опубликованный другим пользователем функции сообщества, который, как вы знаете или разумно должен знать, не может распространяться на законных основаниях таким образом или что у вас есть договорное обязательство сохранять конфиденциальность (несмотря на его доступность на веб-сайте).
9. Подделывать или удалять любые ссылки на авторов, юридические или другие надлежащие уведомления, обозначения собственности или ярлыки происхождения или источника программного обеспечения или других материалов, содержащихся в загружаемом файле.
10. Предоставление ложной информации о принадлежности к какому-либо лицу или организации.
11. Участвовать в любых других действиях, которые ограничивают или препятствуют использованию веб-сайта кем-либо или которые, по мнению Компании, могут нанести вред Компании или пользователям веб-сайта или подвергнуть их ответственности.
12. Нарушать любые применимые законы или постановления или нарушать любой кодекс поведения или другие правила, которые могут быть применимы к какой-либо конкретной функции Сообщества.
13. Собирать или иным образом собирать информацию о других, включая адреса электронной почты, без их согласия.
B. Вы понимаете и признаете, что несете ответственность за любой контент, который вы отправляете, вы, а не Компания, несете полную ответственность за такой контент, включая его законность, надежность и уместность. Если вы публикуете сообщения от имени или от имени вашего работодателя или другой организации, вы заявляете и гарантируете, что у вас есть на это право. Загружая или иным образом передавая материалы в любую часть веб-сайта, вы гарантируете, что эти материалы являются вашими собственными или находятся в общественном достоянии или иным образом свободны от проприетарных или иных ограничений, и что вы имеете право размещать их на веб-сайте.Кроме того, загружая или иным образом передавая материалы в любую область веб-сайта, вы предоставляете Компании безотзывное, бесплатное, всемирное право на публикацию, воспроизведение, использование, адаптацию, редактирование и / или изменение таких материалов любым способом, в любые и все средства массовой информации, известные в настоящее время или обнаруженные в будущем во всем мире, в том числе в Интернете и World Wide Web, для рекламных, коммерческих, торговых и рекламных целей, без дополнительных ограничений или компенсации, если это не запрещено законом, и без уведомления, проверки или одобрения.
C. Компания оставляет за собой право, но не принимает на себя никакой ответственности (1) удалить любые материалы, размещенные на веб-сайте, которые Компания по своему собственному усмотрению сочтет несовместимыми с вышеуказанными обязательствами или иным образом неприемлемыми по любой причине. ; и (2) прекратить доступ любого пользователя ко всему или к части веб-сайта. Однако Компания не может ни просмотреть все материалы до того, как они будут размещены на веб-сайте, ни обеспечить быстрое удаление нежелательных материалов после их размещения.Соответственно, Компания не несет ответственности за какие-либо действия или бездействие в отношении передач, сообщений или контента, предоставленных третьими сторонами. Компания оставляет за собой право предпринимать любые действия, которые она сочтет необходимыми для защиты личной безопасности пользователей этого веб-сайта и общественности; однако Компания не несет ответственности перед кем-либо за выполнение или невыполнение действий, описанных в этом параграфе.
D. Несоблюдение вами положений пунктов (A) или (B) выше может привести к прекращению вашего доступа к веб-сайту и может подвергнуть вас гражданской и / или уголовной ответственности.
Особое примечание о содержании функций сообщества
Любой контент и / или мнения, загруженные, выраженные или отправленные через любую функцию сообщества или любой другой общедоступный раздел веб-сайта (включая области, защищенные паролем), а также все статьи и ответы на вопросы, кроме контента, явно разрешенного Компания, являются исключительно мнениями и ответственностью лица, представляющего их, и не обязательно отражают мнение Компании.Например, любое рекомендованное или предлагаемое использование продуктов или услуг, доступных от Компании, которое публикуется через функцию сообщества, не является признаком одобрения или рекомендации со стороны Компании. Если вы решите следовать какой-либо такой рекомендации, вы делаете это на свой страх и риск.
Ссылки на сторонние сайты
Веб-сайт может содержать ссылки на другие веб-сайты в Интернете. Компания не несет ответственности за контент, продукты, услуги или методы любых сторонних веб-сайтов, включая, помимо прочего, сайты, связанные с Веб-сайтом или с него, сайты, созданные на Веб-сайте, или стороннюю рекламу, и не делает заявлений относительно их качество, содержание или точность.Наличие ссылок с веб-сайта на любой сторонний веб-сайт не означает, что мы одобряем, поддерживаем или рекомендуем этот веб-сайт. Мы отказываемся от всех гарантий, явных или подразумеваемых, в отношении точности, законности, надежности или действительности любого контента на любых сторонних веб-сайтах. Вы используете сторонние веб-сайты на свой страх и риск и в соответствии с условиями использования таких веб-сайтов.
Права собственности на контент
Вы признаете и соглашаетесь с тем, что все содержимое веб-сайта (включая всю информацию, данные, программное обеспечение, графику, текст, изображения, логотипы и / или другие материалы) и его дизайн, выбор, сбор, расположение и сборка являются являются собственностью Компании и защищены законами США и международными законами об интеллектуальной собственности.Вы имеете право использовать содержимое веб-сайта только в личных или законных деловых целях. Вы не можете копировать, изменять, создавать производные работы, публично демонстрировать или исполнять, переиздавать, хранить, передавать, распространять, удалять, удалять, дополнять, добавлять, участвовать в передаче, лицензировать или продавать какие-либо материалы в Интернете. Сайт без предварительного письменного согласия Компании, за исключением: (а) временного хранения копий таких материалов в ОЗУ, (б) хранения файлов, которые автоматически кэшируются вашим веб-браузером для улучшения отображения, и (в) печати разумного количество страниц веб-сайта; в каждом случае при условии, что вы не изменяете и не удаляете какие-либо уведомления об авторских правах или других правах собственности, включенные в такие материалы.Ни название, ни какие-либо права интеллектуальной собственности на любую информацию или материалы на веб-сайте не передаются вам, а остаются за Компанией или соответствующим владельцем такого контента.
Товарные знаки
Название и логотип компании, а также все связанные названия, логотипы, названия продуктов и услуг, появляющиеся на веб-сайте, являются товарными знаками компании и / или соответствующих сторонних поставщиков. Их нельзя использовать или повторно отображать без предварительного письменного согласия Компании.
Отказ от ответственности
Компания не несет никакой ответственности за материалы, информацию и мнения, предоставленные или доступные через Веб-сайт («Контент сайта»). Вы полагаетесь на Контент сайта исключительно на свой страх и риск. Компания не несет никакой ответственности за травмы или ущерб, возникшие в результате использования любого Контента Сайта.
ВЕБ-САЙТ, СОДЕРЖАНИЕ САЙТА И ПРОДУКТЫ И УСЛУГИ, ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ ИЛИ ДОСТУПНЫЕ ЧЕРЕЗ САЙТ, ПРЕДОСТАВЛЯЮТСЯ НА УСЛОВИЯХ «КАК ЕСТЬ» И «ПО ДОСТУПНОСТИ», СО ВСЕМИ ОШИБКАМИ.КОМПАНИЯ И НИ ЛИБО, СВЯЗАННОЕ С КОМПАНИЕЙ, НЕ ДАЕТ НИКАКИХ ГАРАНТИЙ ИЛИ ЗАЯВЛЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ КАЧЕСТВА, ТОЧНОСТИ ИЛИ ДОСТУПНОСТИ ВЕБ-САЙТА. В частности, НО БЕЗ ОГРАНИЧЕНИЯ ВЫШЕИЗЛОЖЕННОГО, НИ КОМПАНИЯ И НИ ЛИБО, СВЯЗАННОЕ С КОМПАНИЕЙ, НЕ ГАРАНТИРУЕТ ИЛИ ЗАЯВЛЯЕТ, ЧТО ВЕБ-САЙТ, СОДЕРЖАНИЕ САЙТА ИЛИ УСЛУГИ, ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ НА САЙТЕ ИЛИ ЧЕРЕЗ САЙТ, БУДУТ ТОЧНЫМИ, НАДЕЖНЫМИ ИЛИ БЕСПЛАТНЫМИ ИЛИ БЕСПЛАТНЫМИ ЧТО ДЕФЕКТЫ БУДУТ ИСПРАВЛЕНЫ; ЧТО ВЕБ-САЙТ ИЛИ СЕРВЕР, КОТОРЫЙ ДЕЛАЕТ ЕГО ДОСТУПНЫМ, НЕ СОДЕРЖИТ ВИРУСОВ ИЛИ ДРУГИХ ВРЕДНЫХ КОМПОНЕНТОВ; ИЛИ ЧТО ВЕБ-САЙТ ИНАЧЕ ОТВЕЧАЕТ ВАШИМ ПОТРЕБНОСТЯМ ИЛИ ОЖИДАНИЯМ.КОМПАНИЯ ОТКАЗЫВАЕТСЯ ОТ ВСЕХ ГАРАНТИЙ, ЯВНЫХ ИЛИ ПОДРАЗУМЕВАЕМЫХ, ВКЛЮЧАЯ ЛЮБЫЕ ГАРАНТИИ КОММЕРЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ, ПРИГОДНОСТИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕННОЙ ЦЕЛИ И НЕ НАРУШЕНИЯ.
НИ ПРИ КАКИХ ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ КОМПАНИЯ ИЛИ ЕЕ ЛИЦЕНЗИАРЫ ИЛИ ПОДРЯДЧИКИ НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ ЗА ЛЮБЫЕ УБЫТКИ ЛЮБОГО РОДА, ПО ЛЮБОЙ ЮРИДИЧЕСКОЙ ТЕОРИИ, ВОЗНИКАЮЩИЕ ИЛИ В СВЯЗИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВАМИ ИЛИ НЕВОЗМОЖНОСТЬЮ ИСПОЛЬЗОВАТЬ ВЕБ-САЙТ, СОДЕРЖИМОЕ САЙТА, ЛЮБЫЕ УСЛУГИ, ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ НА САЙТЕ ИЛИ ЧЕРЕЗ ВЕБ-САЙТ ИЛИ ЛЮБОЙ САЙТ, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ПРЯМЫЕ, КОСВЕННЫЕ, СЛУЧАЙНЫЕ, СПЕЦИАЛЬНЫЕ, КОСВЕННЫЕ ИЛИ КАРАТНЫЕ УБЫТКИ, ВКЛЮЧАЯ, НО НЕ ОГРАНИЧИВАЯСЯ, ЛИЧНЫЕ ТРАВМЫ, ПОТЕРЯ ФРАГОВ ИЛИ УБЫТКОВ , ВИРУСЫ, УДАЛЕНИЕ ФАЙЛОВ ИЛИ ЭЛЕКТРОННЫХ СООБЩЕНИЙ, ИЛИ ОШИБКИ, УПУЩЕНИЯ ИЛИ ДРУГИЕ НЕТОЧНОСТИ НА ВЕБ-САЙТЕ ИЛИ СОДЕРЖАНИИ САЙТА, ИЛИ УСЛУГАХ, НЕОБХОДИМО ИЛИ НЕТ НЕОБХОДИМОСТИ КОМПАНИИ И ПРЕДОСТАВЛЯЛА ЛИ КОМПАНИЯ ВОЗМОЖНОСТЬ ЛЮБЫЕ ТАКИЕ УБЫТКИ, ЕСЛИ НЕ ЗАПРЕЩЕНЫ ПРИМЕНИМЫМ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВОМ.
Компенсация
Вы соглашаетесь возместить и обезопасить Компанию и ее должностных лиц, директоров, агентов, сотрудников и других лиц, участвующих в работе Веб-сайта, от любых обязательств, расходов, убытков и издержек, включая разумные гонорары адвокатам, возникающих в результате любое нарушение вами настоящих Условий использования, использование вами веб-сайта или любых продуктов, услуг или информации, полученных с веб-сайта или через него, ваше подключение к веб-сайту, любой контент, который вы отправляете на веб-сайт через любые Функция сообщества или нарушение вами каких-либо прав другого лица.
Применимое право; Международное использование
Настоящие условия регулируются и толкуются в соответствии с законами штата Пенсильвания без учета каких-либо принципов коллизионного права. Вы соглашаетесь с тем, что любые судебные иски или иски, вытекающие из настоящих Условий использования или связанные с ними, будут подаваться исключительно в суды штата или федеральные суды, расположенные в Пенсильвании, и вы тем самым соглашаетесь и подчиняетесь личной юрисдикции таких судов для цели судебного разбирательства любого такого действия.
Настоящие Условия использования применимы к пользователям в США, Канаде и Пуэрто-Рико. Если вы заходите на веб-сайт из-за пределов США, Канады или Пуэрто-Рико, пожалуйста, посетите соответствующий международный веб-сайт, доступный по адресу www.vwr.com, для ознакомления с применимыми условиями. Если вы решите получить доступ к этому веб-сайту из-за пределов указанных юрисдикций, а не использовать доступные международные сайты, вы соглашаетесь с настоящими Условиями использования и тем, что такие условия будут регулироваться и толковаться в соответствии с законами США и штата. Пенсильвании и что мы не делаем никаких заявлений о том, что материалы или услуги на этом веб-сайте подходят или доступны для использования в этих других юрисдикциях.В любом случае все пользователи несут ответственность за соблюдение местных законов.
Общие условия
Настоящие Условия использования, в которые время от времени могут вноситься поправки, представляют собой полное соглашение и понимание между вами и нами, регулирующее использование вами Веб-сайта. Наша неспособность реализовать или обеспечить соблюдение какого-либо права или положения Условий использования не означает отказ от такого права или положения. Если какое-либо положение Условий использования будет признано судом компетентной юрисдикции недействительным, вы, тем не менее, соглашаетесь с тем, что суд должен попытаться реализовать намерения сторон, отраженные в этом положении и других положениях Условия использования остаются в силе.Ни ваши деловые отношения, ни поведение между вами и Компанией, ни какая-либо торговая практика не может считаться изменением настоящих Условий использования. Вы соглашаетесь с тем, что независимо от какого-либо закона или закона об обратном, любые претензии или основания для иска, вытекающие из или связанные с использованием Сайта или Условий использования, должны быть поданы в течение одного (1) года после такой претензии или причины. иска возникла или будет навсегда запрещена. Любые права, прямо не предоставленные в настоящем документе, сохраняются за Компанией.Мы можем прекратить ваш доступ или приостановить доступ любого пользователя ко всему сайту или его части без предварительного уведомления за любое поведение, которое мы, по нашему собственному усмотрению, считаем нарушением любого применимого законодательства или наносящим ущерб интересам другого пользователя. , стороннего поставщика, поставщика услуг или нас. Любые вопросы, касающиеся настоящих Условий использования, следует направлять по адресу [email protected].
Жалобы на нарушение авторских прав
Мы уважаем чужую интеллектуальную собственность и просим наших пользователей поступать так же.Если вы считаете, что ваша работа была скопирована и доступна на Сайте способом, который представляет собой нарушение авторских прав, вы можете уведомить нас, предоставив нашему агенту по авторским правам следующую информацию:
электронная или физическая подпись лица, уполномоченного действовать от имени правообладателя;
описание работы, защищенной авторским правом, в отношении которой были нарушены ваши претензии;
идентификация URL-адреса или другого конкретного места на Сайте, где находится материал, который, по вашему мнению, нарушает авторские права;
ваш адрес, номер телефона и адрес электронной почты;
ваше заявление о том, что вы добросовестно полагаете, что спорное использование не разрешено владельцем авторских прав, его агентом или законом; а также
ваше заявление, сделанное под страхом наказания за лжесвидетельство, о том, что приведенная выше информация в вашем уведомлении является точной и что вы являетесь владельцем авторских прав или уполномочены действовать от имени владельца авторских прав.
С нашим агентом для уведомления о жалобах на нарушение авторских прав на Сайте можно связаться по адресу: [email protected].
Ослабление активности ACE2 в легких снижает инактивацию оси des-arg9 брадикинин / BKB1R и способствует LPS-индуцированной инфильтрации нейтрофилов -индуцированная нейтрофильная инфильтрация
AU — Sodhi, Chhinder P.
AU — Wohlford-Lenane, Christine
AU — Yamaguchi, Yukihiro
AU — Prindle, Thomas
AU — Fulton, William B.
AU — Wang, Sanxia
AU — McCray, Paul B.
AU — Chappell, Mark
AU — Hackam, David J.
AU — Jia, Hongpeng
N1 — Информация о финансировании: Мы благодарим Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний за поддержку, грант 60699 (П. Б. МакКрею-младшему). Мы выражаем признательность за поддержку Ядра вектора клеточной культуры и переноса генов, частично поддерживаемого Центром генной терапии муковисцидоза (грант 54759 Национального института диабета, болезней пищеварения и почек) и Фондом муковисцидоза, за подготовку эпителиальных культур дыхательных путей и аденовирусные векторы.Авторские права издателя: © 2018 Американское физиологическое общество. Все права защищены.
PY — 2018/1
Y1 — 2018/1
N2 — Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) — это терминальная карбоксипептидаза, выполняющая важные функции в ренин-ангиотензиновой системе и играющая важную роль при воспалительных заболеваниях легких. ACE2 отщепляет однонуклеотидные остатки от нескольких биоактивных пептидов, таких как ангиотензин II. Однако некоторые из его субстратов в дыхательных путях были идентифицированы, и механизм, лежащий в основе роли ACE2 в воспалительном заболевании легких, полностью не охарактеризован.Пытаясь идентифицировать биологические мишени ACE2 в легких, мы протестировали его действие на дез-Arg9 брадикинин (DABK) в эпителиальных клетках дыхательных путей на основе гипотезы о том, что DABK является биологическим субстратом ACE2 в легких, а ACE2 играет роль играет важную роль в патогенезе острого воспаления легких, частично за счет модуляции передачи сигналов оси DABK / брадикининового рецептора B1 (BKB1R). Мы обнаружили, что потеря функции ACE2 в легких мыши в условиях ингаляции эндотоксина приводит к активации оси DABK / BKB1R, высвобождению провоспалительных хемокинов, таких как хемокин 5 (CXCL5) с мотивом CXC, воспалительный белок макрофагов-2 (MIP2), CXC. мотив хемокина 1 (KC) и TNF-α из эпителия дыхательных путей, усиление инфильтрации нейтрофилов и усиление воспаления и повреждения легких.Эти результаты показывают, что снижение активности ACE2 в легких способствует патогенезу воспаления легких, отчасти из-за нарушения способности подавлять опосредованную осью DABK / BKB1R передачу сигналов, что приводит к более быстрому началу инфильтрации нейтрофилов и более серьезному воспалению в легких. . Наше исследование определяет биологический субстрат ACE2 в дыхательных путях, а также потенциальную новую терапевтическую мишень для воспалительных заболеваний.
AB — Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) — это терминальная карбоксипептидаза, выполняющая важные функции в ренин-ангиотензиновой системе и играющая важную роль в воспалительных заболеваниях легких.ACE2 отщепляет однонуклеотидные остатки от нескольких биоактивных пептидов, таких как ангиотензин II. Однако некоторые из его субстратов в дыхательных путях были идентифицированы, и механизм, лежащий в основе роли ACE2 в воспалительном заболевании легких, полностью не охарактеризован. Пытаясь идентифицировать биологические мишени ACE2 в легких, мы протестировали его действие на дез-Arg9 брадикинин (DABK) в эпителиальных клетках дыхательных путей на основе гипотезы о том, что DABK является биологическим субстратом ACE2 в легких, а ACE2 играет роль играет важную роль в патогенезе острого воспаления легких, частично за счет модуляции передачи сигналов оси DABK / брадикининового рецептора B1 (BKB1R).Мы обнаружили, что потеря функции ACE2 в легких мыши в условиях ингаляции эндотоксина приводит к активации оси DABK / BKB1R, высвобождению провоспалительных хемокинов, таких как хемокин 5 (CXCL5) с мотивом CXC, воспалительный белок макрофагов-2 (MIP2), CXC. мотив хемокина 1 (KC) и TNF-α из эпителия дыхательных путей, усиление инфильтрации нейтрофилов и усиление воспаления и повреждения легких. Эти результаты показывают, что снижение активности ACE2 в легких способствует патогенезу воспаления легких, отчасти из-за нарушения способности подавлять опосредованную осью DABK / BKB1R передачу сигналов, что приводит к более быстрому началу инфильтрации нейтрофилов и более серьезному воспалению в легких. .Наше исследование определяет биологический субстрат ACE2 в дыхательных путях, а также потенциальную новую терапевтическую мишень для воспалительных заболеваний.
кВт — ангиотензин-превращающий фермент 2
кВт — рецептор брадикинина B1
кВт — хемокин с мотивом CXC 5
кВт — эндотоксин
кВт — воспаление легких
UR — http://www.scopus.com/inward /record.url?scp=85043467113&partnerID=8YFLogxK
UR — http://www.scopus.com/inward/citedby.url? scp = 85043467113 & partnerID = 8YFLogxK
U2 — 10.1152 / ajplung.00498.2016
DO — 10.1152 / ajplung.00498.2016
M3 — Артикул
C2 — 28935640
434 AN — SC — L17-L31JO — Американский журнал физиологии
JF — Американский журнал физиологии
SN — 1040-0605
IS — 1
ER —
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Механизм проникновения Arg 9 -TAMRA в живые клетки. Верхние панели, …
Контекст 1
… мембрана, которая возникает при замерзании, особенно образование гелеобразных состояний мембранных липидов (44), может скрывать спонтанную транслокацию. Мы показали предварительные доказательства того, что эндоцитоз в клетках CHO в основном ингибируется, когда клетки доводятся до комнатной температуры и среда заменяется PBS (28). Поведение Arg 9 -TAMRA на фиг. 2 подтверждает влияние температуры на эндоцитоз в живых клетках СНО. См. Также дополнительные рис. S1-S7. При 37 ° C в среде для выращивания Arg 9 -TAMRA быстро поглощался и концентрировался в небольших внутриклеточных органеллах, что проявлялось сильно пунктированной флуоресценцией.Тот факт, что эти органеллы также содержали флуоресцентный декстран (FD3) …
Контекст 2
… везикула. Помимо декстрана, мы также показали, что белки во внешнем растворе поглощались эндосомами, индуцированными Arg 9 (дополнительный рис. S1), и что некоторые из содержащих Arg 9 органелл подкислялись (дополнительный рис. S5). Поглощение Arg 9 -ТАМРА было быстрым и начиналось всего через несколько минут после добавления пептида. Изображения на рис. 2 были получены через 30-45 мин с 2 M Arg 9 -TAMRA.Более высокая концентрация Arg 9 или более длительная инкубация приводили к большему количеству Arg 9 / FD3-положительных эндосом на клетку (дополнительный рис. S4). Клетки CHO, инкубированные при 37 ° C без Arg 9, не поглощали FD3 или растворимый белок в эндосомы (дополнительный рис. S2). Таким образом, Arg 9 и другие …
Контекст 3
… после добавления пептида. Изображения на рис. 2 были получены через 30-45 мин с 2 M Arg 9 -TAMRA. Более высокая концентрация Arg 9 или более длительная инкубация приводили к большему количеству Arg 9 / FD3-положительных эндосом на клетку (дополнительный рис.S4). Клетки CHO, инкубированные при 37 ° C без Arg 9, не поглощали FD3 или растворимый белок в эндосомы (дополнительный рис. S2). Таким образом, Arg 9 и другие катионные CPP запускают начало крупномасштабного эндоцитоза, который не происходит в их отсутствие. Это может объяснить, почему катионные CPP могут «доставлять» наночастицы и грузы, к которым они не связаны ковалентно (27,45). Это также может помочь объяснить их потенциал токсичности (см. …
Контекст 4
… поведение Arg 9 -TAMRA резко изменилось при 22 ° C (комнатная температура), при которых он накапливался на плазматических мембранах Клетки СНО, но не проникали в клетки детектируемым образом и не вызывали детектируемого эндоцитоза (рис.2 и дополнительные рис. S6 и S7). Мы пришли к выводу, что клетки CHO в PBS при 9 -TAMRA либо при 37 ° C в среде для полного роста, либо при 22 ° C в PBS.